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藥物活性測試技術—AlphaScreen

瀏覽次數:12434 發布日期:2019-12-9  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
近年來在生命科學領域中興起的新技術——Alpha,是一種基于增強的化學發光的均相免疫技術,已廣泛用于各項生物實驗的研究,包括應用于藥物活性測試。Alpha技術包括AlphaScreen和AlphaLISA技術, 兩種方法都使用同一種供體微珠,但使用不同的受體微珠。
AlphaScreen技術是基于生物分子物質的相互作用的原理發展起來的,如抗原抗體反應、蛋白DNA相互作用、蛋白相互作用等,通過分子之間的相互作用形成供體微珠、受體微珠和相互作用分子的復合物。使用680nm的激光激發供體微珠導致單線態氧分子釋放,引發能量轉移級聯反應,受體微珠發射520~620nm的光波, 具有較強的抗淬滅能力。若生物分子不存在特異的相互作用,單體氧將無法擴散到受體微珠,則不會有信號的產生[1]
Alpha技術既可以用于檢測細胞內的各個生物標志物,也可以進行各類分子相互作用研究,近年來Alpha技術也可以應用于藥物活性檢測。藥物活性測試在藥物質量控制中較為重要,目前對藥物的活性分析方法主要是體外檢測。上海美迪西的生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經驗,通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等,提供一套完整的生物學服務。    
AlphaScreen技術應用于藥物研發領域,其主要優勢在于待測物質的范圍寬泛,包括從小分子到大型復合物;均相體系、快速、穩定,靈敏度更高。而且AlphaScreen檢測也不需要熒光標簽的引入,避免了空間位阻影響生物分子的相互結合。AlphaScreen技術也可以用于檢測諸如細胞裂解物、血清、血漿、體液等生物學粗提取,而不會影響測讀效果。
然而AlphaScreen技術主要的限制在于反應體系對于強光或是長時間的室內光敏感;某些化合物對于單體氧分子的捕獲會降低光信號;供體珠光漂白效應使得信號檢測以單次為佳。與ECL、FMAT技術相似,AlphaScreen也需要高能激光器;同其他技術相比,AlphaScreen對于檢測儀器平臺有要求。
AlphaLISA技術是在AlphaScreen技術的基礎上發展而來,其發射峰在615nm處,避開了血清以及組織中其他成分的發射峰。與AlphaScreen相比,AlphaLISA的發射光會受到500-600nm吸收光干擾的可能性更低,無論這種干擾是來自人工合成的化合物或是天然產物(比如血紅蛋白),從而使檢測的背景降至最低。高通量的生物標志物篩選分析對于自動化檢測儀器平臺的要求較迫切,而目前常見的生物標志物檢測技術為ELISA。AlphaLISA技術也可以用于生物標志物檢測,檢測原理類似于雙抗體夾心法,該技術能夠很好地滿足生物標志物的高通量篩選需求。
AlphaLISA技術還可以用于合成化合物的活性測試。如有研究者設計、合成一系列黃酮乙酸類衍生物腫瘤血管破壞劑,并測定其體外抗腫瘤活性[2]。研究者以鄰羥基苯乙酮為起始原料,通過氯甲基化、氰基取代、水解以及縮合等反應得到相應的目標化合物;以5,6-二甲基呫噸酮-4-乙酸(DMXAA)為陽性對照藥,通過3種模型對目標化合物的抗腫瘤活性進行評價,包括采用Al-phaLISA法檢測目標化合物對RAW 264.7細胞的促TNF-α分泌作用、采用MTS法測定化合物的細胞毒作用,以及采用雞胚絨毛尿囊膜模型測定化合物對雞胚血管生成的影響。研究結果發現合成的18個化合物均未見文獻報道,其結果經1 H-NMR、MS譜確證;活性評價結果表明有3個目標化合物在抗腫瘤測試中表現出較好的體外抗腫瘤活性.
[1] AlphaLISA技術的發展及應用[J].
[2] 黃酮乙酸類衍生物腫瘤血管破壞劑的設計、合成及其抗腫瘤活性的初步評價[J].
發布者:上海美迪西生物醫藥有限公司
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