Celigo成像分析技術在細胞增殖中的應用
細胞增殖是腫瘤研究的必備實驗之一。最簡單直接的檢測細胞增殖的方法就是在不同時間點進行細胞計數，但是在96孔板甚至384孔板的實驗設置下，這無疑是難以操作的。于是，研究者們更傾向于用間接方法研究細胞增殖，比如基于線粒體內脫氫酶還原能力的MTT, MTS, CCK-8法，還有基于胞內ATP水平的CellTiter-Glo, ATPlite等。原理上，這些方法都是以細胞的代謝水平來代表細胞數量。但是大家有沒有懷疑過這些間接方法真能準確反映細胞的生長狀態嗎？
美國Genentech公司的科學家對這一問題進行了深入的研究。在2013年發表的一篇文獻中，作者選擇了兩種最常見的檢測細胞增殖的方法 – MTS和 CellTiter-Glo和直接細胞計數法進行比較，得到了意想不到的結果。
如上圖所示，HT29細胞被6種不同藥物處理48小時后用不同方法對細胞增殖進行了分析。從生長曲線來看，這三種方法得到的結果之間有不小的差異。比如Etoposide（ 細胞周期特異性的抗腫瘤藥），雖然最高與最低劑量得到的殺傷效率分別相同，但細胞計數與另兩種方法的曲線趨勢完全不同，所得IC50也小得多。又比如Gemcitabine（DNA合成抑制劑）, 細胞計數所測得的最高劑量殺傷效率比另兩種方法測得的要高得多。總體來說，與細胞計數相比較時，MTS和CellTiter-Glo會不同程度地低估藥物殺傷效率。
那造成這些差異的原因是什么呢？在文章的開頭我們提到了，MTS和CellTiter-Glo都是基于細胞代謝水平的檢測方法。這就出現了一個bug: 如果一種藥物直接對細胞代謝有影響，會有什么樣的結果呢？作者隨后進行了一系列深入研究，得出結論：當藥物造成細胞周期阻滯時，反映細胞代謝水平的信號與細胞數之間不再成線性關系。此時細胞內的ATP和脫氫酶水平均會顯著上升，導致MTS和CellTiter-Glo得到更高的信號值，從而高估細胞數量。
謎題解開了，不過也給小伙伴們帶來了一個煩惱：今后如何再愉快地做細胞增殖實驗呢？手動數細胞實在太痛苦了。
美國Nexcelom公司的一款名為Celigo的神器了解一下：
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無標記細胞增殖只用到了Celigo的明場通道，也僅僅是該神器眾多應用中最基本的一個。除了明場，Celigo還配置有4個熒光通道（藍、綠、紅和遠紅），為實驗的設計提供了無限可能。
目前Nexcelom已開發出在細胞健康、腫瘤免疫、病毒學、細胞株構建、干細胞、3D腫瘤球檢測等領域的數十種Celigo應用。感興趣的小伙伴們可以和我們聯系哦！
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