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LS18光片顯微鏡應用紀實

瀏覽次數:1253 發布日期:2021-2-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負


​長久以來,對物理切片的生物樣本進行觀察,是生物科學家們獲取組織內生物信息的主要方式。然而,隨著科研工作者們越來越深入的科學研究,目前對于組織三維結構信息探索的需求越來越大。例如:在神經系統相關的研究中,由于大多數神經元向多個方向延伸,而薄薄的切片無法獲知整個神經系統的真實結構[1]。

小鼠腦成像:100um切片(左)整腦(右)(锘海拍攝)

獲取三維的結構信息,一種方式是通過連續的組織切片,通過數據重建得到三維結構信息,但由于組織被撕裂、拉伸引起的變形和損失,這種方法很有挑戰;另一種方式,即結合組織透明化技術,對完整組織進行成像觀察,從而獲取其整個系統的結構信息。

 

生物組織內多種多樣的物質會造成不利于成像的光散射與光吸收,這限制了深入組織內部的光學成像。近年來,隨著組織透明化技術[2,3]與光片顯微技術[4]的相繼發展,使得對完整組織進行三維成像成為可能。

CLARITY透明化方法(Karl D, et al. 2013)

 

PEGASOS透明化方法(Hu Z, et al. 2018)

 

由锘海自主研發的LS18平鋪光片顯微鏡[4],通過快速平鋪短而薄的光片,實現大視野成像且不損失空間分辨率,從而達到比傳統光片顯微鏡更先進的快速、多色三維成像。

 

 

平鋪光片技術示意圖(Liang G, et al. 2015)

 

此外,由于組織透明化技術的多樣性,科研工作者可以根據研究目標選取適合的透明化方法,LS18平鋪光片顯微鏡對組織透明化方法均兼容。

https://v.qq.com/x/page/e3228hrj8c4.html?sf=uri

小鼠腦成像,PEGASOS透明化,6.3x拍攝

https://v.qq.com/x/page/d3228ykdcoo.html?sf=uri

小鼠腦干成像,uDISCO透明化,6.3x拍攝
 

https://v.qq.com/x/page/w32285l3y59.html?sf=uri

小鼠腦100um光學切片提取,PEGASOS透明化,4x拍攝

https://v.qq.com/x/page/a3228qkmlap.html?sf=uri
小鼠卵巢成像,Scales透明化,12.6x拍攝

 

目前,锘海LS18顯微鏡已為許多高校、研究機構等老師提供科研服務,自19年投入市場以來,已公開發表論文一篇[5],投稿/編輯中的科研論文十余篇。科研服務主要涉及主動式/被動式組織透明化、主動式/被動式免疫標記、LS18光片顯微成像、數據處理及分析與數據存儲等。

 

除小鼠腦的其它樣本成像結果展示:

 


 

參考文獻:

[1]Ueda HR, Ertürk A, Chung K, et al. Tissue clearing and its applications in neuroscience[J]. Nat Rev Neurosci, 2020, 21(2):61-79.

[2]Chung K, Wallace J, Kim SY, et al. Structural and molecular interrogation of intact biological systems[J]. Nature, 2013, 497(7449):332-337.

[3] Jing D, Zhang S, Luo W, et al. Tissue clearing of both hard and soft tissue organs with the PEGASOS method[J]. Cell Res. 2018, 28(8):803-818.

[4] Gao L. Extend the field of view of selective plan illumination microscopy by tiling the excitation light sheet[J]. Opt Express, 2015, 23(5):6102-6111.

[5] Chen Y , Li X , Zhang D , et al. A Versatile Tiling Light Sheet Microscope for Cleared Tissues Imaging[J]. Cell Rep. 829267, 2020

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