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微透析技術在組織檢測分析 的應用

瀏覽次數:1422 發布日期:2022-4-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

隨著社會的進步,微透析技術作為一種較為先進的微量生物化學取樣技術得到了廣泛應用。其主要原理是用具有一定截留分子量的半透膜制成微透析探針,當微透析探針被植入目標組織中后,細胞外液中的小分子在濃度梯度驅動下通過半透膜擴散至灌注液中,然后將具有一定流速的流出液收集,之后利用其他精密儀器進行必要的檢測、分析。

傳統的微透析方法多采用微透析探針進行腦內神經遞質的監測。但有限的時間分辨率、空間分辨率、膜孔徑等因素,限制了微透析廣泛的應用,隨著幾十年的發展,一些實驗室對微透析技術進行了深入的探索,這使得微透析具有更廣泛的應用前景。

微透析技術在各研究領域中的應用

 

一,微透析在生物學領域中的應用

臨床萬古霉素(Van)治療需要長時間給藥以達到持續的治療效果。準確、快速、持續的Van檢測可以為醫生在現實環境中調整劑量和治療計劃提供基于數據的指導,但這種醫療監測需求尚未得到滿足。因此MuFangya等創建了一種Van特異性熒光生物傳感器,結合微透析采樣技術開發了一種快速、簡單、準確和靈敏的檢測方法,并在體內對Van進行了驗證。Van特異性探針是通過分別將Van結合肽L-Lys-D-Ala-D-Ala的二聚衍生物的兩條肽鏈中的每一條與熒光丹磺酰氯基團綴合而產生的。在正常家兔和腺嘌呤誘導的慢性腎功能衰竭(CRF)家兔中記錄了Van的受試者特異性藥代動力學,這表明體內治療藥物監測的可行性。他們建立的該方法有利于臨床治療中Van的持續監測,并且為臨床治療各種疾病時監測血藥濃度的其他有效方法提供科學依據。

二,微透析在神經學領域中的應用

衰老與急性免疫挑戰的神經炎癥反應增強有關,常被稱為“炎癥反應”。然而,關于炎癥標志物的基線水平是否在老化大腦的環境條件下升高,或者這種變化是否主要是在對急性挑戰的反應中觀察到的,存在相互矛盾的報道。PerkinsAmyE.等采用兩種不同的方法評估年輕和衰老Fischer344大鼠的炎癥標志物。其中采用大分子活體微透析技術測定成年(3個月)和老年(18個月)雄性和雌性大鼠海馬組織中炎癥因子的細胞外濃度。雖然幾乎沒有觀察到與衰老相關的顯著變化,但CCL3、CCL20和IL-1α的胞外濃度存在著強烈的性別差異。還通過選擇性激動劑BzATP的反向透析評價P2X7嘌呤能受體參與神經炎癥反應。BzATP使IL-1α和IL-1β釋放增加,并迅速抑制CXCL1、CCL2、CCL3、CCL20和IL-6的釋放。在CCL3、IL-1β和IL-6中觀察到了其他值得注意的隨年齡變化的性別差異。這些發現共同為神經炎癥的晚期衰老和性別差異及其P2X7受體調控提供了重要的新見解。

三,微透析在醫學領域中的應用

肝移植術后急性排斥反應的臨床和生化表現是非特異性的,往往需要進行一次肝臟活檢來驗證診斷,但這可能會延誤治療。為研究通過微透析監測肝內葡萄糖、乳酸、丙酮酸和甘油是否可用于預測肝移植后早期排斥反應,vonPlatenAnna等對71名接受肝移植的患者術后使用微透析監測。首先根據標準方案確定1個月內出現急性排斥反應的患者,其次對實驗對象每隔12h計算葡萄糖、乳酸、丙酮酸、甘油和乳酸/丙酮酸比率的曲線下面積(AUC),比較有無排斥反應的患者的這些參數,以及標準的肝血檢查和零時間活檢。結果顯示,肝移植后早期微透析檢測到的代謝模式表明原發性缺血再灌注損傷和排斥反應之間可能存在聯系,識別這些模式有助于鑒別有發生急性排斥反應風險的患者。

四,微透析在土壤元素含量測定中的應用

磷是作物必需的營養元素,精確時空施用磷肥可以改善植物磷的獲取并減少磷的徑流損失。磷的優化施用受益于了解其從肥料顆粒釋放到土壤中的動態,這需要對磷進行空間和時間分辨測量其在土壤中的含量。PetroselliChiara等結合微透析和X射線計算機斷層掃描來研究土壤中P的遷移。微透析探針能夠在最小物理干擾的情況下從一個位置重復進行溶質采樣,并且它們的小尺寸允許進行空間分辨監測。結果表明,與傳統的測量技術(例如吸盤)相比,微透析測量提供了一種侵入性較小的替代方案



微透析探針的類型和清洗

探針是微透析技術的核心,選擇合適的探針是是微透析實驗的關鍵。探針的選擇由植入的區域、透析物質和回收率等因素決定。根據實驗部位以及目標分子的理化性質選擇合適的探針實現活體取樣。

探針有多種類型,同心圓探針、線性探針和U型探針等。其中,同心圓探針和線性探針為常用探針類型。

 

同心圓探針根據探針用途可分為腦部探針和血液探針。腦部探針如CMA探針有CMA 7、CMA 11和CMA 12。其中CMA 7用于小鼠離散大腦區的一種細硬質探針,CMA 11則是用于大鼠離散大腦區的一種細硬質探針,而CMA 12是用于中樞神經系統研究的最佳探針,可長期植入。CMA的血液探針型號為CMA 20,CMA 20 是一種軟性的金屬探針,主要用于清醒自由活動動物或麻醉動物的肌肉、心臟、皮膚和脂肪等。

線性探針是線性管路的結構,管路中間為透析膜,一般用于外周組織,如皮膚、肌肉、心臟、肝臟、眼睛和胰腺等位置,也可以同于腫瘤的植入。可根據實驗需要有相對應截留量的探針進行選擇。

 

微透析系統管路體積都很小,在使用過程中需注意操作規范。

使用前管路系統檢查

探針接上tubing管前, 先用syringe確認tubing管是通的, 無阻塞(若tubing管有阻塞, 會將探針membrane脹破), 再將探針與tubing管一段一段慢慢接上, 確定管路中無氣泡。

 

新探針使用

干式探針:探針放入蒸餾水, 注射器充滿蒸餾水, 流速 2 微升/min, 灌流20 min以上。

 

實驗后探針清洗:

1. 探針先泡肝素液(液態肝素液可跟蒸餾水對半稀釋, 粉末狀肝素可跟蒸餾水配(1mg/ml)20 min。

2. 探針換泡蒸餾水, 注射器放蒸餾水, 流速 2 微升/min, 灌流過夜。

 

使用后保存

可放在蒸餾水中保存探針; 若長時間不使用可晾干保存。

微透析取樣技術,擁有相當廣闊的應用和發展前景。雖然有一些局限,但在近年來的應用中,微透析技術也在不斷改進和完善,并逐漸走向成熟。可以預見,隨著其廣泛應用和技術的不斷發展,將會加速各個研究領域的研究進程并開創它們的新面貌。

 

來源:康森特生物科技(長沙)有限公司
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