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生物材料在生物實驗中的功能驗證方法

瀏覽次數:484 發布日期:2023-6-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

材料生物學也是常規科研工作者會碰到的課題,由于研究人員需要了解支架的功能,將體外人工合成支架材料植入到動物內,了解支架作用,比如促進骨頭愈合、促進肌腱愈合等,因此相關科研工作者也需要在細胞和小動物體內探究創新性材料的生物學作用和毒性,下面給大家介紹一下常見的生物材料體外和體內驗證功能的基礎方案,僅供相關科研工作者參考。
 
1、材料對成骨樣MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)粘附及增殖活性的影響
(1)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養1h
(2)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養6h
(3)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養12h
(4)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養24h
(5)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養48h
實驗1 :MTT/CCK8檢測材料表面附著的成骨細胞的數量或者增值情況;
實驗2:掃描電鏡檢測細胞在材料表面的情況;
實驗3:鬼筆環肽染色檢測材料表面的細胞骨架蛋白的表達情況;
實驗4:活死染色檢測檢測材料表面的成骨細胞活死情況;
 
2、材料對成骨樣MG63細胞分化潛能影響的檢測(1)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養1d
(2)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養7d
(3)MG63細胞/骨髓間充質干細胞(成骨誘導)+材料,培養14d
實驗1:檢測材料對血MG63細胞中ALP活性檢測;
實驗2:茜素紅染色檢測材料對成骨誘導的影響;
實驗3:QPCR檢測材料對成骨細胞分化標志物的表達量影響;
實驗4:ELISA檢測材料對成骨細胞分泌蛋白的影響;
 
3、體內實驗驗證材料對成骨的影響和效果;(1)兔子正常組
(2)兔子缺損植入組(根據材料的特征和作用選擇缺損部位植入部位)
植入后4周、8周、12周時處死取材(根據材料的作用特征選擇處死時間),取植入材料以及周邊組織,進行下列檢測:
(1)HE和masson染色觀察材料周邊組織的形態變化以及愈合情況;
(2)免疫組化或者免疫熒光檢測:材料和周邊組織中檢測分化指標的表達量情況;
(3)QPCR和WB:檢測材料周邊組織中關鍵的成骨指標或者其他關鍵指標的表達情況。
 
  • 相關部分實驗結果例圖:
 

4、參考文獻
[1] 章篩林.人工關節假體陰極弧沉積氧化鋯膜對成骨細胞生物活性影響的實驗研究[D].蘇州大學,2013.DOI:10.7666/d.D336777.
[2] 朱禮偉.溫敏膠原負載TGF-β3填充3D打印微孔支架促進腱-骨愈合的研究[D].吉林大學,2022.
來源:北京至真科言生物科技有限公司
聯系電話:13125140628
E-mail:zzky_2022@163.com

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