蛋白質印跡或免疫印跡 (Western blot，簡稱 WB) 是一種常見的實驗室方法，用于檢測蛋白質并評估其表達水平。根據其分子量和與特定抗體的免疫反應性來鑒定感興趣的蛋白質。蛋白質印跡由一系列相互關聯的步驟組成 (圖 1)[1]。

圖 1. 蛋白質印跡相互關聯的步驟^[1]。 

 (1) 將樣品 (通常是蛋白質混合物) 加載到凝膠上。Marker 標記包含各種已知分子量的預標記蛋白質，與蛋白質樣品一起加載到凝膠上作為尺寸參考。(2) 凝膠電泳用于根據蛋白質的分子量來分離蛋白質。(3) 將蛋白質轉移或“印跡”到膜上。(4) 封閉膜以減少非特異性結合，然后依次用特異性結合目標蛋白的一抗和二抗進行探測。后者結合一抗并攜帶允許隨后檢測的酶或熒光團。(5) 分別通過化學發光反應或熒光檢測信號。(6) 準備蛋白質印跡圖像以供發表。

由于該實驗時間長、細節多，從樣品制備到顯影，每個步驟中都可能存在問題，最后得到的條帶往往千奇百怪、不盡人意……在這篇推文中，我們將為您介紹一些常見的 WB 實驗問題以及相應的解決方案[2]。小 M 助您避免實驗中的各種困擾，快來看看吧！

▐ 1. 微笑條帶：

可能性原因：遷移過快、電泳緩沖液溫度偏高、蛋白質超載或孔內運行緩沖液不足。

建議：應降低遷移速度、預冷緩沖液、減少蛋白上樣量、緩沖液完全覆蓋孔，確保內室緩沖液不會泄露到外室[4][6]。

▐ 2. 皺眉條帶：

▐ 3. 條帶拖尾：

▐ 4. 啞鈴狀不均勻條帶：

建議：重新配置膠，確保膠質量無問題來避免該現象出現；在樣品使用前離心。

▐ 5. 條帶粘連：

建議：可通過減少上樣量和提高配膠質量來避免。

▐ 6. 條帶空泡：

建議：確保在組裝“三明治”時，移除凝膠和印跡膜間的所有氣泡。

▐ 7. 背景有不均勻的黑色斑點：

建議：封閉液一定要充分溶解，封閉結束之后要用 TBST 清洗三遍再加一抗；抗體孵育時保持搖動。

▐ 8. 條帶空斑：

建議：可減少蛋白上樣量；降低一抗和二抗濃度；或者稀釋顯影液。

通過本篇推文介紹，相信普通的難題已經難不倒你們了! 如果以上內容沒有解決您的問題，歡迎大家在下方留言，小 M 歡迎大家積極交流實驗中遇到的各種疑難問題~