在生物制品、藥品及醫療器械的生產過程中，熱原與細菌內毒素的檢測是確保產品安全放行的重要一環。美國食品藥品監督管理局（FDA）通過一系列指導文件，如美國藥典（USP）第<85>章“細菌內毒素檢測”、USP第<161>章“輸血和輸液組件及類似醫療器械”，以及美國醫療器械促進協會（AAMI）ST72:2002/R2010《細菌內毒素——檢測方法、常規監測和批量檢測替代品》，為行業提供了詳盡的檢測建議和驗收標準。

本文旨在基于這些指導文件，并補充了藥典未涵蓋的監管觀點，以明確FDA對產品熱原和細菌內毒素檢測提交與維護的看法。今日首發第一期，誠邀您一探究竟！
 

Q1：對于中控測試和成品放行，如何建立取樣計劃?
針對制劑的CGMP法規和醫療器械質量體系法規，要求研發控制措施時必須具備充分的科學性和制定恰當的取樣計劃。

盡管USP通則<85>未直接涉及取樣計劃的詳細信息，但AAMI ST72指南中提供了相關指導。制藥公司應該增加一個取樣計劃作為應用文件的一部分。在制定取樣計劃時，公司需全面考慮原輔材料、中間物料及成品中潛在的污染風險，并特別關注制造設計因素，如工藝一致性、中控保持時間對細菌內毒素水平的影響、細菌內毒素去除步驟的有效性，以及成品內毒素標準的設定。

此取樣計劃應被視為動態管理的一部分，初期應追求最大覆蓋范圍以確保充分控制。隨著制造工藝的成熟和內控能力的增強，公司可適時調整取樣計劃以優化資源利用。在調整取樣計劃時，制藥公司必須及時更新其法規文件，確保與現行法規要求保持一致。

對于藥品和生物制品，取樣計劃的任何中間變更通常需作為年度報告的一部分進行提交。而對于醫療器械，則可能需采取30天通知的方式，以便監管機構及時了解變更情況并進行評估。

Q2：什么時候進行復驗是合適的?

在測試過程中，若遇到沖突性結果，制藥公司應首先參考USP通則<85>中關于凝膠法測試的解釋部分，以獲取關于復驗的明確指導。根據通則<85>的特別說明，當測試在低于最大有效稀釋倍數（MVD）時失敗，應采取一個不超過MVD的更大稀釋倍數來進行復驗。

在進行復驗時，實驗室必須詳細記錄所有測試過程，包括失敗的測試記錄，以便后續分析和追溯。如果測試在MVD水平進行且出現超標結果（OOS），不能歸因于測試錯誤，該批次應被視為不合格并予以拒收。

為確保測試過程的一致性和合規性，所有測試規程，包括上述提到的復驗規程，都應以書面的標準操作規程（SOP）形式提前建立，并經過公司質量控制部門負責人的嚴格審查和批準。

Q3：樣品的儲存和處理是否重要?
重要。儲存和處理步驟影響細菌內毒素檢測的能力。企業應利用證明可檢測細菌內毒素含量穩定性的實驗室數據，制定用于細菌內毒素分析的樣品儲存和處理（包括產品混合）程序。規程應考慮到研究中使用的細菌內毒素來源，同時牢記純化的細菌內毒素與本地細菌內毒素的反應可能不同。

Q4：在分析之前，用于內毒素分析的成品樣品是否可以混合組成復合樣品?
是的。除了一些例外情況（見下文），成品單位可以混合組成復合樣品以進行細菌內毒素分析。復合樣品可以是水溶性藥品中一個生產批次中的整個單位或成品容器的部分等分樣品（等容積）。對于小容量注射劑（≤100ml），只要按比例調整最大有效稀釋倍數（MVD），樣品混合通常是可接受的，因為將含有有害水平細菌內毒素的樣品和含有較低的、較小危害水平內毒素的樣品一起稀釋具有降低數值的潛在可能性。

這種“調整后的MVD”是通過將單個樣本計算的MVD除以要混合的樣本總數而獲得的。FDA建議在每個復合樣品中不要混合多余3個樣品，以保持開始、中間和最后產品容器的樣品代表性。如果由于稀釋不夠，導致MVD降低，無法克服與產品有關的檢測干擾，則應單獨檢測樣品。
 

醫療器械成品也可以混合成一個復合樣品進行細菌內毒素分析。對醫療器械的檢測應采用ISO 10993-1和ISO 10993-12中所述的淋洗法/洗脫法進行測試，也適用于抑制和增強的目的。取樣可根據特殊情況進行調整。在適當的稀釋/富集后，可以獲得一個生產批次成品的復合樣品，這個混合的富集物應該保存在對穩定性有利的條件下，直到進行平行樣測試。

FDA建議混合樣品應該由對每個產品容器采用無菌工藝均等去除（最少30秒劇烈混合）后構成的復合樣品。在這種情況下，假如混合樣品發生OOS情況，原始單個容器才可以進行復驗。

有些類型的產品不能混合。兩個例子分別是，具有最初較低的MVD的藥品（參見上文“調整后的MVD"的討論）和混懸液產品，因為樣品均分時，均性會面臨顯著差異。FDA也不建議對來自制造工藝的不同中控階段中控樣品進行混合，因為這些物料的均勻性很難確認。

隨著對熱原與細菌內毒素檢測從取樣到處理的全面剖析，相信您已對這一關鍵質量控制環節有了更為清晰的認識，今日首發的第一期僅是系列文章的序幕，更多精彩內容即將陸續呈現，誠邀您持續關注！