HEK293培養(yǎng)基適合于不同亞型HEK293細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)
上海惠誠生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Basal Medium）與補料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完全化學(xué)成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動物來源的成分，適合于不同亞型 HEK293 細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)，可實現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)：培養(yǎng) 5 天表達(dá)量在200mg/L 左右，7 天表達(dá)量 500mg/L 左右，部分可達(dá) 1g/L 以上。
上海惠誠生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。
HEK293 細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品描述
| 名稱 | 備注 | 谷氨酰胺 | 葡萄糖 | 生長因子 | 適用細(xì)胞 |
| HEK293 CD05 | 初始培養(yǎng)基 | 含 | 6 g/L | 不含 | Expi293F 等 |
| HEK293 FM01AB | 補料培養(yǎng)基 | 不含 | 60g/L | 不含 | |
| HEK293 enhancer | 分泌性蛋白表達(dá)增強劑 | 不含 | |||
| PEI | 轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5mg/mL | |||
推薦使用說明
| 步驟 | 使用方法 |
| 關(guān)鍵參數(shù)匯總 | 轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L |
| 細(xì)胞傳代 |
0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當(dāng)細(xì)胞倍增時間不低于對照培養(yǎng)基時認(rèn)為細(xì)胞完全適應(yīng)新培養(yǎng)基，進(jìn)入下一步驟 |
| 轉(zhuǎn)染前一天 | 細(xì)胞密度調(diào)整到~2 e6 cells/mL 左右 |
| 質(zhì)粒與 PEI 預(yù)處理 |
以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關(guān)試劑需要按體積折算） 1： 取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培養(yǎng)基混合均勻； 2：像 1）中混合液體中加入 26ug 的質(zhì)粒（即質(zhì)粒用量 1.3mg/L)，混合均勻； 3: 靜止 15~20min |
| 轉(zhuǎn)染 |
1：用新鮮培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）； 2：緩慢滴加上述 PEI 與 DNA 的混合物，并搖動搖瓶使混合物均勻分散； 3：轉(zhuǎn)染當(dāng)日記為 Day0，放入 37℃搖床中，完成轉(zhuǎn)染； |
| 補料培養(yǎng) |
1：轉(zhuǎn)染后~24h 內(nèi)補加 0.5%的 HEK293 enhancer （ 僅此一次，且只分泌性蛋白或抗體需要添加 ，膜蛋白無需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB； 2：Day4 再補加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖 （如培養(yǎng)時間≤5 天，此步忽略）； 3：活力≤70%即可培養(yǎng)結(jié)束或其他指定培養(yǎng)基時間 |
| 溫度及其他參數(shù) |
1：溫度 37℃，不降溫 2：搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2； |
產(chǎn)品運輸及存儲
運輸：常溫或冷鏈運輸；
存儲：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉：2 年；
基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體：1 年；
補料培養(yǎng)基干粉：2 年；
補料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個月內(nèi)使用完）。
應(yīng)用范圍
上海惠誠生物生物提供的培養(yǎng)基可用于 HEK293 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、傳代、高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可
實現(xiàn)細(xì)胞快速生長，維持細(xì)胞高活率及蛋白該表達(dá)。
使用指南
細(xì)胞凍存
1．準(zhǔn)備處于對數(shù)生長期狀態(tài)較好的細(xì)胞，且細(xì)胞活率在 90%以上；
2．檢測活細(xì)胞密度，計算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計算最終細(xì)胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．準(zhǔn)備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．設(shè)置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞至凍存體積；
5．將懸浮細(xì)胞等分保存至適宜規(guī)格的細(xì)胞凍存管中；
6．將細(xì)胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行降溫；
7．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。
細(xì)胞復(fù)蘇
1．提前打開水浴鍋，并設(shè)置溫度至 36.5℃~37.0℃；
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