糖基化修飾是生物體內普遍發(fā)生的一種翻譯后修飾，生物體內約50%的蛋白均可發(fā)生糖基化，在很多生命過程和疾病中發(fā)揮著非常重要的作用。目前許多疾病診斷的標志物及治療的靶標也都是糖蛋白。

糖蛋白中的蛋白質是生理功能的主要承擔者，而糖鏈則影響著蛋白質的整體構象，如蛋白的折疊、胞內定位、細胞間的相互識別等，即糖鏈影響了由構象決定的蛋白的所有功能。因此研究糖蛋白的功能，不僅要分析蛋白質，也要分析糖鏈的組成。

近年來以質譜為核心的糖蛋白質組學正成為解析糖鏈、修飾位點和蛋白的主要技術，但糖鏈的多樣性增加了糖肽鑒定的復雜性，而且糖鏈本身也容易被串聯(lián)質譜碎裂，且糖鏈的碎裂能量與肽段不相同，因此亟需一種更完善、準確可靠的方法流程解析糖鏈、肽段和蛋白。

現(xiàn)中科新生命推出完整N-糖肽蛋白質組學分析服務，通過HILIC 富集方法，并結合最新一代超高分辨質譜，實現(xiàn)N-糖基化位點和糖型組成的完整解析和糖基化的大規(guī)模定性定量分析，讓糖組學研究唾手可得。自此中科新生命建立了O-GlcNAc糖基化組學、完整N糖肽組學和N糖基化修飾組學全面的糖基化組學服務。

完整N-糖肽實驗流程圖

三大產品特色

1.完整N-糖肽蛋白質一站式多維分析，提供修飾組學研究更創(chuàng)新研究方案

完整N-糖肽蛋白組學僅通過一次實驗，可同時分析糖鏈+修飾位點+修飾肽段+修飾蛋白， 實現(xiàn)糖基化研究多維度分析結果，一站式解析糖型、糖基化位點、糖基化肽段和蛋白。并且樣本類型兼容性廣泛，血漿、細胞、組織樣本等均可友好適用。完整N-糖肽為血液樣本的創(chuàng)新研究提供了新的選擇。

圖1 完整N-糖肽解析結果示例

2.采用pGlyco 3.0高準確度糖型分析軟件

近年來，國內外都開發(fā)了不少解析完整N-糖肽的相關軟件，但目前解析方法仍有明顯的局限性：大部分工具無法對糖鏈的鑒定進行質控，尤其涉及到復雜的糖型時；檢索速度慢；無法對多個糖基化位點精準定位；無法鑒定含有修飾糖單元的完整糖肽等問題。

中科新生命推出的完整N-糖肽組的分析軟件為pGlyco 3.0，該軟件是目前首個提出聚糖優(yōu)先的糖肽搜索引擎，該方法的特色是先搜索糖鏈部分，通過糖鏈鑒定的質控，縮小搜索空間從而提高檢索速度，并且過濾掉不可靠的糖型從而提高鑒定精度。此外對于含有多個糖基化修飾位點的糖肽，pGlyco 3.0采用動態(tài)規(guī)劃算法對糖基化位點進行精準定位。至此，pGlyco 3.0實現(xiàn)了從糖鏈、多肽和糖肽三個層面的質控保證了結果的準確性和可靠性。

圖2 多種完整N-糖肽軟件的比較分析（pGlyco 3.0 vs Byonic vs MSFragger vs MetaMorpheux）

（pGlyco 3.0在準確度和搜索速度上均有明顯的優(yōu)勢）

3.高特異性、高通量、無偏向的N糖基化富集方法

完整N-糖肽組采用親水相互作用色譜法--ZIC-HILIC對糖蛋白進行富集分析，該方法可以實現(xiàn)對完整N-糖肽無偏向、高特異性、高通量的富集。

圖3 多種糖蛋白富集方法的比較分析（ZIC-HILIC vs HILIC vs 酰肼化學法 vs TiO₂）

(①HILIC和ZIC-HILIC得到的N -糖肽數(shù)量相當(分別為1118和1138);但ZIC-HILIC的富集特異性 (46%)高于HILIC(34%)②在四種富集技術中，酰肼化學富集特異性最高(93%)，但鑒定出的N-糖肽數(shù)量相對較少(667)，在TiO₂色譜中，特異性富集含有唾液酸的糖肽，富集得到318個唾液糖肽，特異性僅為26%)

應用領域推薦
完整N-糖肽組學主要應用于生物標志物、分子分型和修飾表達譜領域和方向。