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多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定,體內標記技術,標記效率高達99%。
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技術簡介
SILAC即細胞培養條件下穩定同位素標記技術(Stable isotope labeling with amino acidsin cell culture,SILAC),其基本原理是采用輕、重穩定同位素標記的賴氨酸/精氨酸進行細胞培養,細胞經傳代培養6代后,細胞97%以上的蛋白質將被輕、重穩定同位素標記。等量混合標記穩定同位素標記的蛋白質,酶解后,進行質譜分析。SILAC標記技術是體內標記技術,且不影響細胞的功能,靈敏度高,廣泛應用于比較蛋白質組學研究中。
技術優勢
l 多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定,后續試驗對樣品的影響是一致的,減少了試驗操作和儀器設備引入的實驗誤差。
l 體內標記技術,標記效率高達99%。
l 定量線性范圍廣,尤其對相對差異較大的蛋白定量精確。
l 可以對多種在DMEM、DMEM-F12,1640三種培養基中培養的細胞進行標記。
l 該技術屬于體內標記,其標記效率不受裂解液成分的影響,標記效果穩定。
實驗流程
送樣標準
l 細胞能夠在補充透析胎牛血清的DMEM, DMEM/F12, 1640培養基中培養。
l 景杰負責細胞培養:
請將細胞培養瓶灌滿培養基,在4度環境中運送。
培養過程中需要的特殊試劑由客戶提供,或由我們代購。
l 客戶負責細胞培養:
客戶在標記6代后,需要提供少量細胞進行標記效率檢測。達到97%以上方可放大培養。
客戶需提供50ul以上細胞沉淀。
l 從培養基中收集細胞后,請用4度預冷PBS洗滌三次,細胞沉淀-80度保存,干冰運送。