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Arraystar m6A-circRNA表觀轉(zhuǎn)錄組芯片,可定量檢測circRNA中m6A的表觀轉(zhuǎn)錄修飾水平。
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Arraystar m6A-circRNA表觀轉(zhuǎn)錄組芯片,可定量檢測circRNA中m6A的表觀轉(zhuǎn)錄修飾水平。
芯片優(yōu)勢
與MeRIP-seq相比,Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片有其獨(dú)特的優(yōu)勢:
• 可同時(shí)檢測何種轉(zhuǎn)錄本攜帶修飾,以及不同條件下的修飾差異,更重要的是,還可以檢測每一種轉(zhuǎn)錄本的修飾比例
• 全面覆蓋了編碼基因和非編碼基因,甚至用MeRIP-seq方法很難檢測的lncRNA也可用芯片檢測
• 不需要去除rRNA,比MeRIP-seq更簡單便捷
• 樣本需求量少,總RNA量低至1ug
• 適用于多種樣本,比如降解的FFPE樣本,血清/血漿/全血樣本
Arraystar circRNA表觀轉(zhuǎn)錄組芯片產(chǎn)品列表
服務(wù) | 芯片 | 表觀修飾 | 規(guī)格 | 描述 |
---|---|---|---|---|
Human circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片技術(shù)服務(wù) | Human circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片 | m6A | 8×15K | 3,617 circRNAs |
Mouse circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片技術(shù)服務(wù) | Mouse circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片 | m6A | 8×15K | 14,236 circRNAs |
Rat circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片技術(shù)服務(wù) | Rat circRNA 表觀轉(zhuǎn)錄組芯片 | m6A | 8*15k | 14,145 circRNAs |
芯片特點(diǎn)
芯片可定量每一種轉(zhuǎn)錄本的修飾百分比
同一種RNA轉(zhuǎn)錄本的修飾亞群和非修飾亞群,由于其結(jié)構(gòu)和結(jié)合蛋白的不同,會(huì)導(dǎo)致不同的命運(yùn)(圖1)。重要的是,轉(zhuǎn)錄本的修飾比例與它們的功能高度相關(guān)。然而目前的修飾檢測方法,比如MeRIP-seq(m6A-seq),可以確定修飾的位置,卻無法對一個(gè)特定RNA轉(zhuǎn)錄本修飾和非修飾部分的相對含量進(jìn)行定量。Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片能夠在同一個(gè)芯片中通過雙熒光通道的方法檢測每個(gè)轉(zhuǎn)錄本修飾亞群和非修飾亞群的百分比(圖 2),同時(shí)對何種轉(zhuǎn)錄本發(fā)生修飾和不同條件下轉(zhuǎn)錄本的修飾差異進(jìn)行鑒定。
圖 1.同一種RNA轉(zhuǎn)錄本,隨著其修飾的化學(xué)計(jì)量數(shù)發(fā)生變化,其功能也隨之改變。在某一種細(xì)胞條件下,攜帶修飾的“RNA 轉(zhuǎn)錄本a”所占百分比可能非常低(比如,細(xì)胞狀態(tài)1),但在另外一種條件下豐度變的很高(比如,細(xì)胞狀態(tài)2)。通過引起RNA結(jié)構(gòu)改變,或招募修飾閱讀蛋白, “轉(zhuǎn)錄本a”的命運(yùn)發(fā)生變化,比如從蛋白翻譯轉(zhuǎn)變?yōu)镽NA降解。
圖 2.Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片可以在同一張芯片上使用Cy5檢測免疫共沉淀的修飾RNA,用Cy3檢測上清中的非修飾RNA,從而檢測每一個(gè)轉(zhuǎn)錄本中修飾和非修飾的百分比。選擇性剪切產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄本異構(gòu)體可以被轉(zhuǎn)錄本特異性探針?biāo)鶛z測。
覆蓋編碼基因和非編碼基因的表觀轉(zhuǎn)錄組
•Arraystat mRNA&lncRNA Epitranscriptomic Microarrays
適用于mRNA, lncRNA, pre-miRNA, pri-miRNA, snoRNA, 和 snRNA
•Arraystar circRNA Epitranscriptomic Microarray
適用于環(huán)狀RNA,芯片收集了高可信度的環(huán)狀RNA(在≥2個(gè)實(shí)驗(yàn)組和≥4個(gè)樣本中有表達(dá))
•對MeRIP-seq很難檢測的RNAs(比如lncRNA和circRNA),也具有高靈敏度和準(zhǔn)確度
轉(zhuǎn)錄本特異性的RNA修飾檢測
選擇性剪切產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄本異構(gòu)體具有組織特異性和不同的生物功能。例如,TRIM9短的異構(gòu)體(NM_052978),而非長的異構(gòu)體(NM_015163),能夠促進(jìn)DNA和RNA病毒引起的I型干擾素的表達(dá)。轉(zhuǎn)錄本異構(gòu)體的修飾百分比發(fā)生改變,常與生物功能和疾病相關(guān)。
Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片,使用外顯子和跨剪接位點(diǎn)特異性探針,確保了每個(gè)轉(zhuǎn)錄本異構(gòu)體修飾水平檢測的可信度與精確性,提供了更深層次的表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)信息(圖 3)。
圖 3. Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片使用轉(zhuǎn)錄本特異性探針A和探針B,分別檢測TRIM9的長轉(zhuǎn)錄本(NM_015163)和短轉(zhuǎn)錄本(NM_052978)攜帶的RNA修飾。
樣本需求量少
目前MeRIP-seq技術(shù)需要≥120ug的總RNA起始量,所需樣本量多,限制了MeRIP-seq的適用性。相比于MeRIP-seq,Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片只需1ug 總RNA的起始量,所需RNA的量大大減少(表 1),為珍貴樣本和來源有限的樣本研究RNA修飾提供了機(jī)會(huì)。
表觀轉(zhuǎn)錄組芯片 | MeRIP Seq | |
---|---|---|
RNA起始量 | ≥1ug total RNA | ≥120ug total RNA |
分離mRNA或去除rRNA | 不需要 | 需要 |
RNA是否完整 | 不需要 | 需要 |
數(shù)據(jù)庫
Human circRNA Epitranscriptomic microarray
探針總數(shù) |
13,617 |
探針長度 |
60nt |
探針位點(diǎn) |
circular junctions |
探針特異性 |
轉(zhuǎn)錄本特異性 |
標(biāo)記方法 |
RNase R 預(yù)處理線性RNA,隨機(jī)引物反轉(zhuǎn),體外轉(zhuǎn)錄標(biāo)記circRNA |
circRNAs |
13,617 |
circRNA來源 |
Updated Databases: circbase, CircNet, circRNADb [1-3] |
芯片規(guī)格 |
8 × 15 K |
Mouse circRNA Epitranscriptomic microarray
探針總數(shù) |
14,236 |
探針長度 |
60nt |
探針位點(diǎn) |
Circular junctions |
探針特異性 |
轉(zhuǎn)錄本特異性 |
標(biāo)記方法 |
RNase R 預(yù)處理線性RNA,隨機(jī)引物反轉(zhuǎn),體外轉(zhuǎn)錄標(biāo)記circRNA |
circRNAs |
14,236 |
circRNA來源 |
Updated Databases: circbase, CircNet, circRNADb [1-3] |
芯片規(guī)格 |
8 × 15 K |
Rat circRNA Epitranscriptomic microarray
探針總數(shù) |
14,145 |
探針長度 |
60nt |
探針位點(diǎn) |
Circular junctions |
探針特異性 |
轉(zhuǎn)錄本特異性 |
標(biāo)記方法 |
RNase R 預(yù)處理線性RNA,隨機(jī)引物反轉(zhuǎn),體外轉(zhuǎn)錄標(biāo)記circRNA |
circRNAs |
14,145 |
circRNA來源 |
Updated Databases: circbase, CircNet, circRNADb [1-3] |
芯片規(guī)格 |
8 × 15 K |
實(shí)驗(yàn)流程
Arraystar表觀轉(zhuǎn)錄組芯片提供完整的服務(wù),從樣本準(zhǔn)備,MeRIP,cRNA標(biāo)記,芯片實(shí)驗(yàn)到注釋和數(shù)據(jù)分析。嚴(yán)格的質(zhì)控步驟保證數(shù)據(jù)質(zhì)量和有效性。交給我們您的樣品,我們將做到最好。
圖 4. m6A-circRNA Epitranscriptomic 芯片實(shí)驗(yàn)流程.
• 客戶提供樣本(具體見樣本指南)
• RNA質(zhì)量檢測
• m6A-RIP
• RNase R 處理去除線性RNA(比如rRNA, lncRNA, mRNA等)
• cRNA合成和標(biāo)記(cy5標(biāo)記IP-RNA,cy5標(biāo)記上清RNA)
• 芯片雜交,洗脫和掃描
• 數(shù)據(jù)采集,數(shù)據(jù)注釋,數(shù)據(jù)分析和總結(jié)
結(jié)果展示
Arraystar在芯片表達(dá)檢測、數(shù)據(jù)分析和結(jié)果注釋方面有著專業(yè)而深入的知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)。為客戶提供豐富而詳細(xì)的表觀轉(zhuǎn)錄組生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析結(jié)果。
差異m6A甲基化circRNA:
差異m6A甲基化mRNA聚類分析: