高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌的工作原理與操作方法！
 

一、原理
 
高壓蒸汽滅菌是實(shí)驗(yàn)室最常用的滅菌方法，適用于培養(yǎng)基，生理鹽水，各種緩沖液及玻璃器皿的滅菌。常用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌鍋有立式、臥式和手提式三種。圖11-1 所示常用手提式滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌的原理是通過提高滅菌鍋內(nèi)的蒸汽溫度以達(dá)到滅菌目的，即，使滅菌鍋夾層的水加熱、沸騰，不斷產(chǎn)生蒸汽，以排除冷空氣，直至空氣排凈后（約排氣10-15 分鐘）關(guān)閉放氣閥，使蒸汽鍋密閉，這時(shí)隨蒸汽壓不斷上升，鍋內(nèi)的溫度也隨之上升，當(dāng)蒸汽壓（飽和蒸汽壓）升到1.05kg/cm2 時(shí)，鍋內(nèi)溫度即達(dá)121.3℃，在該溫度下保持20-30 分鐘，可將所有微生物及芽孢殺死。滅菌所需時(shí)間和溫度取決于被滅培養(yǎng)基中營養(yǎng)物的耐熱性、容器體積大小和裝物量等因素。若滅砂土、石蠟油或含菌量大的物品則應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時(shí)間。
 
干熱滅菌適用于玻璃器皿的滅菌。常用電熱烘箱進(jìn)行，其結(jié)構(gòu)如圖11-2 所示。干熱滅菌主要是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到殺滅微生物的目的。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固性與其本身含水量相關(guān)。當(dāng)菌體受熱時(shí)，環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，蛋白質(zhì)凝固就越快，反之則慢。通常干熱滅菌時(shí)預(yù)先將各種器皿用紙包好或裝入金屬制培養(yǎng)皿箱、移液管筒內(nèi)，再放入電熱烘箱，然后打開電源，加熱升溫至150-160℃，維持2 小時(shí)即可進(jìn)行徹底滅菌。
 
二、儀器與材料
 
1、儀器：立式高壓蒸汽滅菌鍋，手提式高壓蒸汽滅菌鍋，電熱烘箱。
 
2、需滅菌的物品：培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿，用報(bào)紙包好的吸管等。
 
三、方法
 
1、高壓蒸汽滅菌
（1）加水：向滅菌鍋夾層加蒸餾水至適當(dāng)水位刻度；
（2）裝料：放入需滅菌的物品；注意：裝量適當(dāng)，使瓶口或試管口向中心擺放，不要緊貼鍋內(nèi)壁，以防冷凝水沾濕棉塞！
（3）加蓋：蓋好滅菌鍋，對稱擰好螺栓；
（4）滅菌：通電加熱，待滅菌鍋排出大股水蒸汽時(shí)記時(shí)15 分鐘后，關(guān)閉排氣閥。繼續(xù)加熱至所需條件，如壓力達(dá)1.05kg/cm2 即121.3℃，維持20-30 分鐘；
（5）降壓：滅菌后立即關(guān)閉電源，待壓力降至0 時(shí)，打開排氣閥，放空剩余蒸汽。再打開鍋蓋，取出滅菌物品；
（6）后處理：滅菌完畢，放空夾層內(nèi)的水，保持鍋內(nèi)干凈。
 
2、干熱滅菌
（1）裝料：打開烘箱門，放入需滅菌的物品，關(guān)好烘箱門；（注意：勿使紙包物品緊靠烘箱壁，以免引起火災(zāi)！）；
（2）滅菌：打開排氣孔，接通電源，加熱升溫至160℃，關(guān)閉排氣孔，維持2 小時(shí)；（注意：滅菌溫度絕對不可以超過180℃！）
（3）降溫：滅菌后，立即關(guān)閉電源，將溫度旋鈕轉(zhuǎn)至0。待溫度降至20℃以下時(shí)，打開烘箱門，取出滅菌物品。
 
3、滅菌前玻璃器皿的包裝
（1）吸管、滴管的包裝：
① 裁紙：將8 開報(bào)紙裁成約5cm 寬的長紙條；
② 包法：將紙條一端折進(jìn)約3 cm 長使成雙層，將吸管或滴管包進(jìn)雙層紙內(nèi)，并與紙條形成約30°夾角，然后在桌面上不停地卷動，讓紙條成螺旋狀包在管外，最后將多余的紙條回折即可。見圖11-3。
（2）培養(yǎng)皿的包裝：將潔凈干燥的培養(yǎng)皿裝入鐵皮箱，每箱60套，蓋好箱蓋即可。
 
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