猴白介素4（IL-4）ELISA試劑盒操作步驟！

    猴白介素4（IL-4）操作步驟：

    1.加入50ul標準品（Standards）、血清標本于相應反應板孔中。

    2.每孔加入100ul酶聯物（Conjugate），輕輕混勻30秒（重要），室溫60分鐘。

    3.洗板：甩盡板內液體，用蒸餾水或者洗滌液（普通洗滌液，自配）洗滌反應板，并去除 水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；這樣反復洗滌5次。

    4.每孔加入100ul顯色液，輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。

    5.每孔加入50ul終止液（StopSolution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內在450nm處讀OD值。elisa試劑盒

    樣本處理及要求：

    1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

    2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

    3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4.,細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右 （2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

    5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

    6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

    7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    猴白介素4（IL-4）ELISA試劑盒注意事項：

    1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

    2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

    3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

    4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

    5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。