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四種常見PCR儀的區(qū)別及運用

瀏覽次數:5906 發(fā)布日期:2020-1-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
 普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、 熒光定量PCR儀的區(qū)別及運用
 
PCR:即合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction),利用DNA在體外95℃時解旋(變性),55℃時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合(退火),再調溫度至72℃左右,DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈(延伸)。

PCR儀實際就是一個溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。
根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為:普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類

①普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。
普通PCR儀主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。
如:啟步BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型
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②梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應用于科研、教學機構,檢驗、檢疫等。
如:,ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR儀
更多詳情:021-60498640

③原位PCR儀
PCR是提取細胞或組織中的DNA進行基因擴增反應,而原位PCR是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中,更有利于探討靶DNA與細胞之間的關系。

原位PCR儀,主要應用于:(1)檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒感染的檢查上,如HIV、HPV、HBV、CMV等;(2)觀察病原體在體內分布規(guī)律(3)內源性基因片段,如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。(4)檢測導入基因;(5) 遺傳病基因檢測如β-地中海貧血。 

④實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫(yī)學檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。熒光定量檢測技術在臨床診斷方面很多,主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷,如肝炎類疾病、性病、與優(yōu)生優(yōu)育相關的疾病以及肺結核等等。
來源:上海甄明科學儀器有限公司
聯(lián)系電話:021-60498640
E-mail:13501657551@139.com

標簽: 伯樂T100;PCR
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