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酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒原理各種方法與步驟

瀏覽次數:241 發布日期:2020-8-31  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒水平。用純化的捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒,再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠超敏C反應蛋(hs-CRP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒含量。

酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。

操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

來源:上海博湖生物科技有限公司
聯系電話:021-57763112
E-mail:3004987436@qq.com

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