Cas14a1核酸酶是一種內切核酸酶,其在tracrRNA:crRNA(或sgRNA)的引導下,特異結合并切割靶標ssDNA,且無需PAM位點。相比于其他的Cas蛋白,Cas14蛋白的分子量普遍較小(400-700AA),其中,上海惠誠生物提供的Cas14a1的分子量僅為為64.9 kd(含有3.4 k的N端標簽序列)。與Cas12類似,Cas14a1也可以結合靶標核酸并激活其ssDNA反式切割活性,從而被應用于靶標核酸的分子檢測。然而,與Cas12不同的是,Cas14a1只能結合ssDNA靶標,因此:經過擴增富集的靶標核酸需使用T7核酸外切酶進行處理,且其中一條擴增引物需要實驗磷硫酰化修飾以確保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈,從而留下ssDNA靶標鏈以用于Cas14a1介導的分子檢測。上海惠誠生物優勢提供CRISPR基因編輯系列,咨詢訂購熱線:17715331663 QQ:2303607288
正對照反式切割結果: