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病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒操作步驟與常見問題

瀏覽次數:818 發布日期:2021-5-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒​操作步驟:
轉移20 µl 蛋白酶K至1.5ml離心管中。
轉移200 µl樣品,如血清、血漿、尿液、培養液上清、或其它無細胞體液至裝有蛋白酶K的離心管中,震蕩混勻5s。若樣品不足200µl,用Buffer PBS或無核酶水補足。(咽/口腔拭子,或固體組織樣品先用Buffer PBS浸泡或勻漿后,離心取上清進行操作。)
加入200µl 裂解液 至步驟2的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置10min。
加入250µl無水乙醇 至步驟3的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置3min。
把 純化柱 裝在2ml收集管中,轉移步驟4的混合液至純化柱中。12,000rpm離心1min。
倒棄濾液把純化柱裝回收集管中,加入650 µl 洗滌液 至純化柱中,12,000rpm離心1min。
按照步驟6重復一次。
倒棄濾液把純化柱套回收集管,12,000rpm離心空柱2min甩干純化柱。
將純化柱轉移至新的1.5ml離心管,加入50µl Nuclease Free Water至純化柱的膜中央,室溫靜置1min,12,000rpm離心1min。離心管中即為所提取的樣品DNA/RNA。

常見問題:
純化柱堵塞

樣品用量太多:處理動物抗凝血液時,樣品量控制在100-150µl。盡量使用無細胞的樣品,如血漿、血清、組織勻漿液的上清等。
蛋白酶 K活性下降:重新制備蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必須保存于-20℃,避免反復凍融。蛋白酶 K與裂解液不能預先混合。
樣品含固體顆粒:在第4步加入乙醇前,12,000rpm離心3min去除未消化的雜質,轉移上清液至新的離心管后再加入乙醇。
樣品裂解不充分:樣品與裂解液混勻不充分。重新提取,加入裂解液后先顛倒混勻3-5次,然后以高速度渦旋讓樣品與裂解液充分混勻。

下游應用結果不理想
樣品被反復解凍: 避免反復凍溶樣品。推薦使用新鮮樣品或只解凍過一次的樣品。
蛋白酶K活性下降:更換蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必須立即保存于-20℃,避免反復凍融。
Nuclease Free Water被污染:更換新的Nuclease Free Water或DEPC處理水。
乙醇殘留:柱子在洗脫前,需要空甩去除乙醇。對于敏感的應用,柱子在洗脫后,打開柱子的蓋子,放置10-15min讓乙醇徹底揮發。
洗脫效率:處理富含DNA的樣品時,把Nuclease Free Water預熱至55℃后再進行洗脫,有利于提高DNA得率。
發布者:上海邦景實業有限公司銷售部
聯系電話:021-52960951
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