酶標(biāo)板性能判斷的三個(gè)方法
瀏覽次數(shù):292 發(fā)布日期:2021-8-11
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酶標(biāo)板(ELISA PLATE):在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。 抗原、抗體和其它生物分子通過多種機(jī)制吸附至載體表面,這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合,以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。

酶標(biāo)板性能判斷:良好的酶標(biāo)板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。酶標(biāo)板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號(hào)的酶標(biāo)板在使用前須事先檢查其性能。
1、常用的檢查方法為:以一定濃度的人igg(一般為10ng/ml)包被elisa板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人igg抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。以下以a、b、c三款酶標(biāo)板為例。
2、直接法:檢測human igg在酶標(biāo)板表面的吸附
3、雙抗體夾心法:包被山羊抗人抗體檢測陽性血清中抗原
由上圖可以看出,這三類酶標(biāo)板中,a類酶標(biāo)板具有更好的蛋白吸附效果,同時(shí)也提高蛋白吸附的靈敏度,能夠提供更為可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。另外,可以詢問酶標(biāo)板的批內(nèi)差異,以下是某款酶標(biāo)板的批內(nèi)差異。由批內(nèi)差異數(shù)據(jù)圖可以看出,該酶標(biāo)板具有很好地批間穩(wěn)定性,批內(nèi)變異系數(shù)(cv)差異均在5.0%附近,明顯低于業(yè)內(nèi)關(guān)于臨床免疫反應(yīng)用酶標(biāo)板的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中批內(nèi)變異系數(shù)低于10.0%的要求,因此也適合用于elisa實(shí)驗(yàn)。