微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟
瀏覽次數(shù):297 發(fā)布日期:2022-1-12
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一、 淀粉水解試驗(yàn)
1. 準(zhǔn)備淀粉培養(yǎng)基平板:將熔化后冷卻至50℃左右的淀粉培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿中,待凝固后制成平板。
2. 接種:用記號(hào)筆在平板底部劃成兩部分,在每部分分別寫上菌名,用接種環(huán)取少量的待測(cè)菌,點(diǎn)接在培養(yǎng)基表面的相對(duì)應(yīng)部分的中心,其中一個(gè)菌種應(yīng)是枯草桿菌做對(duì)照菌
3. 培養(yǎng):將接種后的平皿置于28℃恒溫箱培養(yǎng)24h。
4. 檢測(cè):取出平板,打開(kāi)平皿蓋,滴加少量的碘液于平板上,輕輕旋轉(zhuǎn),使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。菌落周圍如出現(xiàn)無(wú)色透明圈,則說(shuō)明淀粉已經(jīng)被水解,表示該細(xì)菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小說(shuō)明測(cè)試菌株水解淀粉能力的強(qiáng)弱。
二、油脂水解試驗(yàn)
1. 將裝有油脂培養(yǎng)基的三角瓶置于沸水浴中熔化,取出并充分振蕩,使油脂均勻分布,再傾入無(wú)菌平皿中,待凝固成平板。
2. 接種:于同一平皿的兩邊接種,其中一種是金黃色葡萄球菌作為對(duì)照菌。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h,取出后觀察平板菌苔顏色,如果出現(xiàn)紅色斑點(diǎn),即說(shuō)明脂肪被水解了,此反應(yīng)為正反應(yīng)。紅色斑點(diǎn)大小說(shuō)明測(cè)試菌株水解脂肪能力的強(qiáng)弱。
三、明膠液化試驗(yàn)
1. 接種:用穿刺接種法接種大腸桿菌或產(chǎn)氣腸桿菌于明膠培養(yǎng)基中。
2. 培養(yǎng):放20℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。若細(xì)菌在20℃下不長(zhǎng),則應(yīng)放在最適溫度下培養(yǎng)。
3. 觀察結(jié)果:觀察培養(yǎng)基有無(wú)液化情況及液化后的形狀。因明膠在低于20℃時(shí)凝固,高于25℃時(shí)自行液化,若是在高于20℃下培養(yǎng)的細(xì)菌,觀察時(shí)應(yīng)放在冰浴中觀察,若明膠被細(xì)菌液化,即使在低溫下明膠也不會(huì)再凝固。
四、石蕊牛乳試驗(yàn)
1. 接種:將黏乳產(chǎn)堿桿菌和銅綠假單胞菌接種入石蕊牛乳培養(yǎng)基中。
2. 培養(yǎng):將接種后的試管于37℃恒溫培養(yǎng)7d,另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作為對(duì)照。
3. 結(jié)果觀察:取出培養(yǎng)物,以不接種任何細(xì)菌的試管為對(duì)照,觀察接種不同細(xì)菌生長(zhǎng)后的變化情況。
五、甲基紅試驗(yàn)(M.R.試驗(yàn))
將大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,32℃培養(yǎng) 24h,加甲基紅指示劑數(shù)滴,觀察結(jié)果,呈現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性,呈現(xiàn)黃色者為陰性。
注意事項(xiàng):
1. 在淀粉水解實(shí)驗(yàn)中,觀察各種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,加入碘液時(shí)要輕輕旋轉(zhuǎn),使得碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。
2. 每個(gè)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照組,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 細(xì)胞生長(zhǎng)較快,需要及時(shí)觀察和記錄。
4. 接種前要用記號(hào)筆做好標(biāo)記,接種時(shí)要對(duì)號(hào)接種。