NK-92與NK-92MI細胞培養要點
NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92MI細胞是轉染得到的源自NK-92細胞的IL-2非依賴的NK細胞株。親本細胞NK-92通過微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉化�？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標記陰性。其親本IL-2依賴的細胞株NK-92細胞及另一株同樣來源于NK-92細胞株的IL-2非依賴的細胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細胞和NK-92CI細胞這兩個變種都包含、表達并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細胞不合成表達。
NK-92培養要點
➊ NK-92細胞為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數細胞分散，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片;
➋ NK-92細胞對IL-2敏感。培養基中IL-2降解，將導致細胞狀態變差。IL-2在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應超過一周。配制好的新鮮培養基要盡快用完，建議每次使用前拿出來預熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；
➌ NK-92細胞對離心敏感。正常培養時，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數，細胞狀態不佳或細胞量少的時候，一般不建議離心；
➍ NK-92細胞對機械力較敏感。正常培養時，應盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使死細胞和細胞碎片增加。
➎ 正常培養時，NK-92細胞團的間隙有部分死細胞和細胞碎片是正常的，如細胞碎片過多，可通過低速離心去除部分細胞碎片（800rpm,5min）。
➏ 血清質量差異可能引起細胞狀態變化，建議選用高質量的胎牛血清。
➐ 細胞生長時，聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團在顯微鏡下呈現白色透亮狀。若細胞聚集太多，出現細胞團中部發暗時，可傳代；
➑ 細胞對培養液營養要求很高，在正常培養過程中應避免細胞團塊太大，這會導致營養不足；細胞團塊過大時，需要稍微吹散，注意控制吹打次數，不需刻意吹散成單個細胞。
➒ NK-92的傳代方法：將細胞團用移液器輕輕吹散，均分到兩個瓶子里，每瓶再補充等量培養基。
➓ NK-92的凍存方法：細胞凍存的時候，細胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
➊ NK-92MI細胞為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數細胞分散，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片；
➋ NK-92MI細胞對離心敏感。正常培養時，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數，細胞狀態不佳或細胞量少的時候，一般不建議離心；
➌ NK-92MI細胞對機械力較敏感。正常培養時，應盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使死細胞和細胞碎片增加。
➍ 正常培養時，NK-92MI細胞團的間隙有部分死細胞和細胞碎片是正常的，如細胞碎片過多，可通過低速離心去除部分細胞碎片（800rpm,5min）。
➎ 血清質量差異可能引起細胞狀態變化，建議選用高質量的胎牛血清。
➏ 細胞生長時，聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團在顯微鏡下呈現白色透亮狀。若細胞聚集太多，出現細胞團中部發暗時，可傳代；
➐ 細胞對培養液營養要求很高，在正常培養過程中應避免細胞團塊太大，這會導致營養不足；細胞團塊過大時，需要稍微吹散，注意控制吹打次數，不需刻意吹散成單個細胞。
➑ NK-92MI的傳代方法：將細胞團用移液器輕輕吹散，均分到兩個瓶子里，每瓶再補充等量培養基。
➒ NK-92MI的凍存方法：細胞凍存的時候，細胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
NK-92培養要點
➊ NK-92細胞為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數細胞分散，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片;
➋ NK-92細胞對IL-2敏感。培養基中IL-2降解，將導致細胞狀態變差。IL-2在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應超過一周。配制好的新鮮培養基要盡快用完，建議每次使用前拿出來預熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；
➌ NK-92細胞對離心敏感。正常培養時，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數，細胞狀態不佳或細胞量少的時候，一般不建議離心；
➍ NK-92細胞對機械力較敏感。正常培養時，應盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使死細胞和細胞碎片增加。
➎ 正常培養時，NK-92細胞團的間隙有部分死細胞和細胞碎片是正常的，如細胞碎片過多，可通過低速離心去除部分細胞碎片（800rpm,5min）。
➏ 血清質量差異可能引起細胞狀態變化，建議選用高質量的胎牛血清。
➐ 細胞生長時，聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團在顯微鏡下呈現白色透亮狀。若細胞聚集太多，出現細胞團中部發暗時，可傳代；
➑ 細胞對培養液營養要求很高，在正常培養過程中應避免細胞團塊太大，這會導致營養不足；細胞團塊過大時，需要稍微吹散，注意控制吹打次數，不需刻意吹散成單個細胞。
➒ NK-92的傳代方法：將細胞團用移液器輕輕吹散，均分到兩個瓶子里，每瓶再補充等量培養基。
➓ NK-92的凍存方法：細胞凍存的時候，細胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
NK-92MI培養要點
➊ NK-92MI細胞為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數細胞分散，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片；
➋ NK-92MI細胞對離心敏感。正常培養時，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數，細胞狀態不佳或細胞量少的時候，一般不建議離心；
➌ NK-92MI細胞對機械力較敏感。正常培養時，應盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使死細胞和細胞碎片增加。
➍ 正常培養時，NK-92MI細胞團的間隙有部分死細胞和細胞碎片是正常的，如細胞碎片過多，可通過低速離心去除部分細胞碎片（800rpm,5min）。
➎ 血清質量差異可能引起細胞狀態變化，建議選用高質量的胎牛血清。
➏ 細胞生長時，聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團在顯微鏡下呈現白色透亮狀。若細胞聚集太多，出現細胞團中部發暗時，可傳代；
➐ 細胞對培養液營養要求很高，在正常培養過程中應避免細胞團塊太大，這會導致營養不足；細胞團塊過大時，需要稍微吹散，注意控制吹打次數，不需刻意吹散成單個細胞。
➑ NK-92MI的傳代方法：將細胞團用移液器輕輕吹散，均分到兩個瓶子里，每瓶再補充等量培養基。
➒ NK-92MI的凍存方法：細胞凍存的時候，細胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
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