▌試劑盒選用 | 血清、血漿 
 

▌試劑盒保存

產(chǎn)品常溫運輸。收到產(chǎn)品后，請于4℃保存，可以穩(wěn)定保存一年。

▌操作流程

▌血清樣本（ 100-500 µL）-試劑盒Exo-spin EX02, EX07-96

01、樣本預(yù)處理-去除細胞和細胞碎片

a、300 x g 離心 10 min 以去除細胞，取上清。

b、16,000 x g 離心 30 min，以去除細胞碎片，取上清。

02、沉淀外泌體（若血清樣本為100 µL則無需進行沉淀步驟）

a、以 1:2 的比例加入沉淀劑（例如，將 250 µL沉淀劑添加到 500 µL 血清樣本中）。 

b、顛倒離心管混勻，并在 4°C 孵育至少 5 min。 

c、將混合液以 16,000 x g 離心 30 min，棄去上清液。

d、用 100 µL PBS 重懸含有外泌體的沉淀。

03、外泌體純化

a、將100 µL外泌體重懸液加入純化管柱（預(yù)處理后的）頂端。

b、讓液體在重力作用下進入柱基質(zhì)中，丟棄流出液。

c、將純化管柱置入新的 1.5 mL 離心管以收獲外泌體；加入180 μL PBS至純化管柱頂端， 并通過重力洗脫。

d、將含有分離外泌體的樣本收集管以 100 x g 短暫離心30 s，以便將所有液體收集到管底部，分離的外泌體即可用于下游應(yīng)用。
 

▌Exo-spin 提取外泌體數(shù)據(jù)結(jié)果

Exo-spin提取的血清外泌體顯示出優(yōu)異的得率和純度。通過納米顆粒追蹤分析（NTA）檢測，每條曲線代表不同分離方法得到外泌體的3次技術(shù)重復(fù)測量的平均值。（PM=沉淀法，數(shù)據(jù)來源Martins, TS et al., 2018).

NTA和EXOCET分析對比Exo-spin與沉淀法提取的血清外泌體樣本

▌Exo-spin外泌體提取試劑盒部分引用參考文獻

• Lobos-González L, Bustos R, Campos A, et al (2020). Exosomes released upon mitochondrial ASncmtRNA knockdown reduce tumorigenic properties of malignant breast cancer cells. Scientific Reports 15;10(1):343. 

• Bliss CM, Parsons AJ, Nachbagauer R, et al (2019). Targeting Antigen to the Surface of EVs Improves the In Vivo Immunogenicity of Human and Non-human Adenoviral Vaccines in Mice. Molecular Therapy - Methods & Clinical Development 24;16:108-125. 

• Yang Y, Knight R, Stephens P, et al (2019). Three-dimensional culture of oral progenitor cells: Effects on small extracellular vesicles production and proliferative function. The Journal of Oral Pathology & Medicine 1. 

• Corsello T, Kudlicki AS, Garofalo RP, et al (2019). Cigarette Smoke Condensate Exposure Changes RNA Content of Extracellular Vesicles Released from Small Airway Epithelial Cells. Cells 17;8(12).

▌FAQ

問：有沒有操作視頻可參考？
答：請查閱10分鐘學(xué)會使用SEC方法進行外泌體分離：【外泌體研究】十分鐘get外泌體提取方法！
 

問：不同型號的Exo-spin試劑盒如何選擇？
答：按照血清的起始樣本量以及血清樣本數(shù)量選擇。

a、血清樣本量為100 µL，可選擇EX03(分別有8,24,50個SEC柱子的試劑盒)、EX07(Exo-spin 96,96個SEC柱子)

b、血清樣本量為150 µL，可選擇EX05(分別有5,20個SEC柱子的試劑盒)

c、血清樣本量為500 µL以內(nèi)，可選擇EX02(分別有8,24,50個SEC柱子的試劑盒并含沉淀劑)、EX07(Exo-spin 96,96個SEC柱子，需另外搭配沉淀劑)

d、血清樣本量為1 mL，可選擇EX04(分別有5,20個SEC柱子的試劑盒，需另外搭配沉淀劑)

問：提取的外泌體怎么保存？
答：短期保存（一周內(nèi)）置于4℃即可，長期保存請放置于-80℃

問：如何確定提取得到的是外泌體？
答：根據(jù)國際細胞外囊泡協(xié)會發(fā)表的指導(dǎo)手冊《MISEV 2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測外泌體標志蛋白。

如何從上清液中提取外泌體請查閱：【外泌體提取純化】常見問題大合集 | 細胞上清

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