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艾狄斯25羥基維生素D酶聯免疫檢測試劑盒操作要點

瀏覽次數:3386 發布日期:2010-7-22  來源:廣州固康

艾狄斯25羥基維生素D酶 聯免疫檢測試劑盒
(25-OH-VD)檢測步驟

         要點和解釋
檢測前將所有試劑平衡至室溫,小心混勻。
 
按照“試劑準備”中所述,復溶或準備相關試劑。
 
1. 準備已作標記的玻璃試管或聚丙烯管用以標準品、質控品和樣本的稀釋。
 
2. 標準品、質控品和樣本各取25μl分別加入到相應標記的試管。
 
3. 所有試管都再加入1ml的25D生物素。用漩渦混合器混合10秒。
 
4. 各取200μl已稀釋的標準品、質控品或樣本分別加入已包被抗體的相應酶標板微孔內,做雙孔。用封口膜密封酶標板,于18-25℃下孵育2小時。
 
5. 用稀釋好的洗液洗板3次。
a) 自動洗板:設置洗板機分配每孔至少300μl洗液。注滿后抽空,如此循環3次。
b) 手動洗板:迅速顛倒倒出孔內物。每孔加入250μl洗液。再重復洗板2次。
在進入下一步之前,于吸水紙上用力拍打倒置的板以除去多余的洗液 。
 
6. 用多道移液器向所有微孔內加入200μl酶結合物。用封口膜密封酶標板,于18-25℃下孵育30分鐘。
 
7. 重復步驟5。
 
8. 用多道移液器向所有微孔內加入200μl TMB底物,用封口膜密封酶標板,于18-25℃下孵育30分鐘。
 
 
 
9. 用多道移液器向所有微孔內加入100μ終止液。
 
10. 加入終止液后的30分鐘內在酶標儀450nm(參考650nm)波長處測量吸光度。
 
 
  • 置于室溫下至少30分鐘,直到平衡至室溫。
  • 輕輕地反復顛倒混勻。

  • 確保使用前試劑完全復溶。
  • 確保所用試管為硼硅酸鹽玻璃試管或聚丙烯管,不能使用聚苯乙烯管因為其可引起結果偏低。
  • 將標準品、質控品和樣本直接加入到試管底部,不要粘到側壁上。
  • 使用移液槍時,沿試管壁加入避免濺出。
  • 充分混勻10秒。
  • 加樣時確保不接觸到酶標板微孔底部。
  • 加樣時不要距離微孔太高,避免濺出。
  • 確保孵育時間剛好。

  • 確保每孔分配合適體積的洗液。
  • 避免微孔內產生氣泡。
  • 洗板后快速輕打酶標板以除去殘留洗液。

  • 使用多道移液器時確保每個吸嘴吸取的試劑量相同。
  • 使用新的稱重盤放置試劑瓶,防止污染。
  • 確保每孔內分配的試劑量準確。
  • 確保每個孔都已密封。
  • 確保孵育時間剛好。
  • TMB底物對光敏感且易受污染。僅移取檢測所需要的量,丟棄沒用完的TMB底物,請勿再倒回瓶內。
  • 確保酶標儀已設置為正確的波長。.
  • 加入終止液后30分鐘內讀數。
 

發布者:廣州固康生物科技有限公司
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