量子點做為無機合成的納米熒光探針，具有高熒光亮度和熒光穩(wěn)定性，適合長時間觀察和活體示蹤。將量子點靶向遞送入細(xì)胞漿，有助于細(xì)胞內(nèi)蛋白瞬時相互作用研究，以及動態(tài)細(xì)胞學(xué)反應(yīng)機制的長時程觀察。目前量子點遞送入細(xì)胞的方法主要分為兩類：①協(xié)助遞送策略：利用穿膜肽、多聚物載體、轉(zhuǎn)染試劑等實現(xiàn)量子點的遞送，但是需要考慮量子點被細(xì)胞內(nèi)吞后的釋放效率；②主動遞送技術(shù)：包括電穿孔和顯微注射，會對細(xì)胞造成一定程度的機械損傷。加州大學(xué)Shimon Weiss課題組，將光熱納米片技術(shù)（Photothermal nanoblade technique）用于量子點偶聯(lián)物的細(xì)胞內(nèi)遞送，不需考慮內(nèi)吞后的釋放效率，同時避免了機械損傷。

研究者將激光脈沖作用于毛細(xì)管吸頭的表面等離子體振子，使其緊鄰的細(xì)胞膜部位形成納秒級爆炸性氣泡，這些氣泡在細(xì)胞膜上瞬時形成切口或孔洞；同時，向毛細(xì)管施壓，形成一股瞬時液流，量子點偶聯(lián)物隨之進入胞漿（圖1a）。與傳統(tǒng)的顯微注射方法比較，光熱納米片與細(xì)胞膜的接觸更加溫和，避免了對細(xì)胞的機械損傷。上述研究者將該技術(shù)用于微管蛋白-量子點偶聯(lián)物的遞送，實現(xiàn)了活細(xì)胞內(nèi)微管骨架的實時觀察。如圖1所示，研究者對于偶聯(lián)策略進行了改進。如果采用一步法直接將量子點與微管蛋白進行偶聯(lián)（圖1c），遞送入細(xì)胞后，量子點可能阻礙微管組裝。為了克服該問題，研究者設(shè)計了多步驟的偶聯(lián)策略（圖1b）：①體外進行微管單體的聚合；②向微管聚合物中加入活化的量子點；③終止反應(yīng)；④使微管聚合物解聚，純化量子點-微管蛋白偶聯(lián)物。研究者將獲得的偶聯(lián)物，以光熱納米片技術(shù)遞送入細(xì)胞，清晰顯示了微管骨架的絲狀結(jié)構(gòu)，并可長時間觀察而沒有淬滅（圖2）。該方法充分利用了量子點在熒光成像中的優(yōu)勢，為細(xì)胞骨架的活細(xì)胞實時觀察提供了新的研究手段。

圖1 量子點與微管蛋白的偶聯(lián)以及偶聯(lián)物的遞送模式圖

(a) 利用光熱納米片技術(shù)將量子點-微管蛋白偶聯(lián)物遞送入細(xì)胞漿；(b) 多步法量子點-微管蛋白偶聯(lián)策略；(c) 一步法量子點-微管蛋白偶聯(lián)策略。

圖2 Hela細(xì)胞的微管骨架成像

(a) 以多步法策略獲得的量子點-微管蛋白偶聯(lián)物在Hela細(xì)胞成像；(b) 以微管蛋白抗體對(a)圖細(xì)胞進行免疫細(xì)胞染色成像；(c) (a)及(b)的疊加；(d) 未偶聯(lián)的量子點在Hela細(xì)胞成像；(e) 以微管蛋白抗體對(d)圖細(xì)胞進行免疫細(xì)胞染色成像；(f) (d)及(e)的疊加。

文獻(xiàn)來源：

Xu J, Teslaa T, Wu TH, Chiou PY, Teitell MA, Weiss S. Nanoblade delivery and incorporation of quantum dot conjugates into tubulin networks in live cells. Nano Lett. 2012;12(11):5669-72.