ELISA試劑盒結(jié)果分析方式方法詳述
在ELISA試劑盒試驗(yàn)中的各項(xiàng)操作細(xì)節(jié)有許多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，加樣時(shí)由低濃度向高濃度加，因?yàn)檫@樣能夠削減跳孔的幾率。而整個(gè)試驗(yàn)的最后關(guān)鍵就是成果的處理辦法了，是ELISA試劑盒結(jié)果分析方法。
1、ELISA試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2、均勻OD值減去空白孔的OD值。
3、規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)適宜的計(jì)算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來(lái)作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條最適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度最高的那條曲線。
假如出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對(duì)照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能趕快進(jìn)行下一步操作、增加樣品或其它試劑時(shí)操作的辦法不對(duì)、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問(wèn)參加的試劑量不同，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請(qǐng)當(dāng)心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、增加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，汲取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、承認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、運(yùn)用已校正過(guò)的微量加樣器，如將*次參加液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。
定性和定量是ELISA測(cè)定按其表示測(cè)定結(jié)果的方式分為的兩大類。定性測(cè)定是對(duì)標(biāo)本中是否存在待測(cè)抗原或抗體作出結(jié)論，分別用“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)表示。由此可見(jiàn)傳染性病原體的抗原或抗體通常是用的定性測(cè)定，以此判斷特定病原體感染的存在與否。
定量測(cè)定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測(cè)定，是對(duì)標(biāo)本中待測(cè)抗原的數(shù)量進(jìn)行量值測(cè)定，以具體數(shù)值來(lái)表示。定量測(cè)定，如激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物、小分子藥物等FP，hCG、細(xì)胞因子等的定量測(cè)定。
ELISA定性測(cè)定的“陰性"和“陽(yáng)性"的判定依據(jù)是試劑盒所確定的陽(yáng)性判定值(cut-off)。elisa試劑盒中所帶標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)測(cè)定得出的劑量反應(yīng)曲線(又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線)是定量測(cè)定的量值依據(jù)。
ELISA定性測(cè)定結(jié)果判定中常用的一些縮寫也可以幫助您看明白ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
(1)S／CO：其中S為sample(樣本)或specimen(標(biāo)本)的簡(jiǎn)寫，表示的是標(biāo)本測(cè)定的吸光度值，CO為cut-off值的簡(jiǎn)寫。除競(jìng)爭(zhēng)抑制法外，其他ELISA定性測(cè)定模式中，當(dāng)S／CO值大于或等于1時(shí)，標(biāo)本的測(cè)定為陽(yáng)性，小于1時(shí)為陰性。
(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N為negative(陰性對(duì)照)的簡(jiǎn)寫，P為patient(患者)的簡(jiǎn)寫。較早的試劑盒很多都使用S／N或P／N≥2．1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
1、ELISA試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2、均勻OD值減去空白孔的OD值。
3、規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)適宜的計(jì)算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來(lái)作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條最適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度最高的那條曲線。
假如出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對(duì)照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能趕快進(jìn)行下一步操作、增加樣品或其它試劑時(shí)操作的辦法不對(duì)、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問(wèn)參加的試劑量不同，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請(qǐng)當(dāng)心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、增加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，汲取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、承認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、運(yùn)用已校正過(guò)的微量加樣器，如將*次參加液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。
定性和定量是ELISA測(cè)定按其表示測(cè)定結(jié)果的方式分為的兩大類。定性測(cè)定是對(duì)標(biāo)本中是否存在待測(cè)抗原或抗體作出結(jié)論，分別用“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)表示。由此可見(jiàn)傳染性病原體的抗原或抗體通常是用的定性測(cè)定，以此判斷特定病原體感染的存在與否。
定量測(cè)定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測(cè)定，是對(duì)標(biāo)本中待測(cè)抗原的數(shù)量進(jìn)行量值測(cè)定，以具體數(shù)值來(lái)表示。定量測(cè)定，如激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物、小分子藥物等FP，hCG、細(xì)胞因子等的定量測(cè)定。
ELISA定性測(cè)定的“陰性"和“陽(yáng)性"的判定依據(jù)是試劑盒所確定的陽(yáng)性判定值(cut-off)。elisa試劑盒中所帶標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)測(cè)定得出的劑量反應(yīng)曲線(又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線)是定量測(cè)定的量值依據(jù)。
ELISA定性測(cè)定結(jié)果判定中常用的一些縮寫也可以幫助您看明白ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
(1)S／CO：其中S為sample(樣本)或specimen(標(biāo)本)的簡(jiǎn)寫，表示的是標(biāo)本測(cè)定的吸光度值，CO為cut-off值的簡(jiǎn)寫。除競(jìng)爭(zhēng)抑制法外，其他ELISA定性測(cè)定模式中，當(dāng)S／CO值大于或等于1時(shí)，標(biāo)本的測(cè)定為陽(yáng)性，小于1時(shí)為陰性。
(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N為negative(陰性對(duì)照)的簡(jiǎn)寫，P為patient(患者)的簡(jiǎn)寫。較早的試劑盒很多都使用S／N或P／N≥2．1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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