腺相關(guān)病毒（AAV）載體的優(yōu)勢、常見種類及作用
腺相關(guān)病毒（AAV）具有低致病性、低免疫原性、高基因遞送能力，作為病毒載體廣泛用于基因治療領(lǐng)域。基于AAV載體的基因治療也是美國和歐洲唯一獲批的體內(nèi)基因療法。
圖1 AAV治療
AAV載體有多種優(yōu)勢，如：野生型的AAV未引發(fā)任何疾病；AAV在多種細胞中都能實現(xiàn)有效載荷的長期表達；AAV不具有強免疫原性等。目前超70%基因遞送藥物均采用AAV載體遞送，尤其適用于肝臟、視網(wǎng)膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織。
AAV2
根據(jù)病毒衣殼蛋白的表面抗原差異進行分類，已發(fā)現(xiàn)數(shù)十種不同衣殼蛋白的AAV，不同的AAV具有不同的衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)、序列和組織特異性。這些血清型在體內(nèi)產(chǎn)生不同的抗血清類型。
圖2 AAV三維結(jié)構(gòu), BCRF PDB ID: 1LP3
其中AAV2是最常見的血清型，與其他血清型的氨基酸序列相似性較高，目前幾乎所有的重組AAV病毒載體的核心骨架都是來源于AAV2亞型，所以AAV2也是最早被廣泛研究的AAV血清型。
AAV2是一種小型的非包膜病毒，直徑約為20-25nm，屬于I型嗜肺病毒。主要由一個外殼構(gòu)成，這個外殼由60個亞基組建而成，主要包含三種多肽VP1、VP2和VP3，共同組成了一個能夠保護其內(nèi)部遺傳物質(zhì)的外殼結(jié)構(gòu)，。
AAV2能夠有效轉(zhuǎn)導多種細胞類型，低免疫原性使得在體內(nèi)表達可以持續(xù)較長時間，高轉(zhuǎn)導效率和廣泛的組織特異性使其成為傳遞修復基因至特定細胞的理想載體，已超過200項AAV相關(guān)的臨床試驗正在進行或即將完成。如：重組人5型腺相關(guān)病毒注射液（H101）是中國目前唯一獲得批準的溶瘤病毒藥物，主要用于治療無法切除或術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者；腺相關(guān)病毒載體OBP-301通過瘤內(nèi)注射，聯(lián)合免疫治療食管癌，已進入Ⅰ期臨床階段；腺相關(guān)病毒載體AdVince通過瘤內(nèi)注射治療神經(jīng)內(nèi)分泌瘤，目前處于Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗階段。
AAV NAbs
在AAV基因治療中，抗AAV中和抗體（Neutralizing Antibodys, NAbs）與AAV結(jié)合，影響病毒與靶細胞表面受體結(jié)合，導致顯著降低載體的轉(zhuǎn)導效率和有效性，直接影響基因治療的效果。另外AAV與NAbs形成的復合物也可能引起一系列的免疫反應，影響基因治療的安全性。
NAbs可以在自然感染AAV后形成，也可能在AAV載體給藥后產(chǎn)生。AAV Nabs可能來源于患者體內(nèi)預存的AAV抗體，來自自然感染導致的免疫記憶或是交叉反應性，大約有30-60%的人群體內(nèi)有預存的中和抗體。亦或是在高劑量或者系統(tǒng)性給藥時，AAV載體在體內(nèi)可能引發(fā)宿主的免疫反應產(chǎn)生Nabs。
篩查AAV NAbs是一個重要步驟，目前用于檢測AAV Nabs的主要方法是基于細胞的檢測和配體結(jié)合測定法（間接ELISA或者化學發(fā)光法），通過這些方法對預存抗體的檢測、中和試驗和總抗體測定都是確保基因治療有效性和安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
目前已有多項監(jiān)管指南將篩查AAV抗體納入到伴隨診斷檢測項目中，CDx的上市申請和AAV基因治療的生物制劑許可申請應協(xié)調(diào)一致。AAV抗體檢測在系統(tǒng)性基因治療中至關(guān)重要，它不僅影響治療效果，也是確保患者安全的關(guān)鍵因素。
S-RMab®單克隆抗體
斯達特開發(fā)AAV(intact particle)抗體可識別特定AAV病毒顆粒構(gòu)象表位，用于定量病毒物理滴度和病毒免疫原性分析（ADA）。在免疫原性分析中，斯達特AAV抗體可用于抗衣殼蛋白抗體及中和抗體的檢測，作為陽性對照或在ADA分析中制備標準曲線。
產(chǎn)品名稱：AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435) 貨號：S0B0771
AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435) to be tested were diluted a series of gradients (from 500ng/ml, 2 fold, 9 points) ,and each gradient was co-incubated with AAV2 virus, the mixture was infected with 293T cells after incubation, and RLU luminescence value was detected.
產(chǎn)品信息：
參考文獻
[1] Mendell, Jerry R. , et al. "Testing preexisting antibodies prior to AAV gene transfer therapy: rationale, lessons and future considerations." Molecular therapy. Methods & clinical development 25(2022):74-83.
