Micro-CT檢測腫瘤小鼠模型實驗報告（中山大學腫瘤醫院）
概述：
實驗日期：2010.04.20
實驗目的: 檢測原位接種肝腫瘤細胞的C57小鼠的腫瘤模型制備情況以及腫瘤的生長情況；利用普通的昆明小鼠嘗試普通造影劑對臟器的造影效果。
實驗儀器和試劑：
ZKKS-MCT-III micro-CT系統, ZKKS-MCT-III micro-CT系統軟件；
造影劑：Fenestra VC (ART Advanced Research Technologies Inc., QC, Canada)
臨床用碘海醇（GE, Omnipaque 350 mg I/ml）；
實驗中必須的注射器等耗材。
實驗對象：
表1 用于實驗的小鼠情況
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小鼠名稱 |
體重（g） |
造模情況 |
接種周期 |
|
C57編號為M |
21.0 |
肝原位接種 |
4-5周 |
|
C57編號為N |
19.6 |
肝原位接種 |
4-5周 |
|
KM編號為P |
22.0 |
Null |
Null |
實驗人員：梁藝、劉俊廷、劉延群、冉茂潔、陳曉峰
實驗步驟：
1. M小鼠（C57小鼠21.0 g）
（1）成像前的準備
11:02 M小鼠進行麻醉；
11:08 尾靜脈注射小動物造影劑Fenestra VC
(ART Advanced Research Technologies Inc., QC, Canada)
（2）micro-CT數據采集
14:38 開始掃描，參數設置如下：
X光管電壓：50KVp；功率：60W；
Micro-CT掃描結果如圖1所示。
圖1 編號為M的C57小鼠的橫截面、矢狀面、冠狀面視圖
圖2 通過micro-CT重建后并對切片進行分割所得到的腫瘤組織的三維顯示結果
（圖中棕色的組織為腫瘤組織，紅色為心臟組織，紫色為肺，
綠色為肝，藍色為脾，金黃色為骨骼，肉紅色為脂肪和肌肉）
圖3 小鼠肝部腫瘤組織病理切片
（左側為4倍鏡下觀測結果，右側為20倍鏡下觀測結果）
該小鼠分別在11:36分，12:22分，12:38分，14:38分在同樣的參數下采集數據，數據顯示類似的結果，從切片上可以明顯發現有直徑大約3mm多的近似球形的腫瘤組織，軟件測定的體積為13.0107mm3。
實驗結束后第三天中山腫瘤醫院梁藝博士解剖后沒有發現任何肉眼可辨的腫瘤腫塊，進行病理切片化驗后，發現肝部有腫瘤病灶（見圖3），切片結果與CT測量結果完全一致。
實驗（一）總結：實驗中成功注射了Fenestra VC小動物造影劑，該造影劑的最大優點是可以在體內持續保持長時間造影效果。實驗結果完全滿足了本次模型制備情況監測的目的，發現了直徑大約3mm，總體積為13.0107mm3的腫瘤。
2. N小鼠（C57小鼠19.6 g）
（1）成像前的準備
11:46 對編號為N的小鼠進行麻醉；
12:20 尾靜脈注射Fenestra VC
(ART Advanced Research Technologies Inc., QC, Canada)
（2）micro-CT數據采集
14:15 開始掃描，參數設置如下：
X光管電壓：50KVp；功率：60W；
Micro-CT掃描結果如圖1所示。
掃描結束取出后發現小鼠死亡。
圖4編號為N的C57小鼠的橫截面、矢狀面、冠妝面視圖
（其中紅線內所表示的區域為腫瘤組織）
圖5 通過micro-CT重建后并對切片進行分割所得到的腫瘤組織的三維顯示結果
(圖中金黃色為骨骼，棕色的為腫瘤的腫塊，肉紅色的透明組織為脂肪組織)
為了進一步證實micro-CT掃描檢測到的確實是腫瘤組織，我們對小鼠進行了解剖，解剖出來的腫瘤組織可以發現腫瘤經過大約5周的生長已經形成了很大的腫塊，如圖6所示。通過micro-CT系統配套軟件可以計算出腫瘤所占的體積為1.0631cm3。
圖6 將編號為N的C57小鼠解剖后發現腫瘤的腫塊組織
（左圖為開胸后的C57編號為N的小鼠，右圖為肝及白色的腫瘤腫塊組織）
實驗（二）總結：實驗中成功注射了Fenestra VC小動物造影劑，造影劑注入后2小時小鼠死亡，造影劑沒有在小鼠臟器中得到充分的代謝。死亡的原因分析認為是腫瘤小鼠身體過于虛弱。另外，在micro-CT重建時采用略大于小鼠身體寬度的尺寸重建會使得圖像的分辨率更清晰一些。
3. P小鼠（昆明小鼠22 g）
為進一步采用臨床的碘海醇（GE, Omnipaque 350 mg I/ml）對小鼠臟器組織對比度的造影效果進行驗證，我們結合前期利用碘海醇造影劑總結的經驗，對普通的昆明小鼠進行了臟器的造影成像。
實驗步驟：
（1） 成像前的準備
4月21日 預先對實驗小鼠進行造影
4月22日 14:30麻醉小鼠。
4月22日 15:00開始掃描小鼠
X光管電壓：55KVp；功率：60W；
Micro-CT掃描結果如圖5所示。
圖7 利用臨床碘海醇造影劑造影臟器組織對比度結果
實驗（三）總結：實驗中采用臨床用的碘海醇造影劑，也可以很好的對臟器進行造影；這種造影方法可以大大節約小動物造影劑昂貴的試劑費用。在后續的腫瘤研究中建議采用這種價格低廉的碘海醇造影劑，同樣可以達到比較好的造影效果。
結論：利用ZKKS-MCT-Ⅲ micro-CT系統可以在體、非侵入、連續動態觀測腫瘤細胞在小鼠體內的生長及體積變化情況。本次實驗數據表明不但利用該儀器可以監測造模情況，還可以在將來的腫瘤模型構建成功后，利用該micro-CT系統也可以準確地對給藥治療過程中腫瘤體積和形狀等情況進行觀測。本次實驗圓滿地達到了預期的效果。
標簽：
Micro-CT 腫瘤 造影劑
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