ABI 3730XL測序平臺的原理及特點

瀏覽次數：13389　發布日期：2011-6-8　來源：上海美吉生物醫藥科技有限公司

Applied Biosystems 3730XL測序儀是高質量的長片段讀取和序列分析的測序平臺，應用靈活而廣泛。3730XL可同時分析96個樣品，該儀器采用4色熒光同時檢測，可不間斷24小時運行，自動灌膠，上樣，電泳分離，檢測及數據分析。本儀器除了能夠完成新基因測序工作或比較測序工作外，還可進行多種片段分析，包括微衛星 DNA 分析，比較基因型分析，單核苷酸多態性 (SNP) 研究等。

ABI 3730XL測序儀

測序峰圖

雙脫氧鏈終止法原理

雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法，其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進行復制時，在四管反應體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團，當ddNTP摻入鏈的末端時，該鏈就會停止延伸。如此每管反應體系中就產生了一系列長度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。反應終止后，分4個泳道進行凝膠電泳以分離長短不一的DNA片段，相鄰的片段長度相差一個堿基。經放射自顯影后，根據片段3’端的雙脫氧核苷，便可獲得合成片段的堿基排列順序。

Sanger法測序原理圖

ABI 3730XL測序儀技術原理

ABI 3730XL自動測序儀是基于毛細管電泳和熒光標記技術的DNA測序儀。基于Sanger法，3730XL測序儀擁有96道毛細管，并用熒光標記代替了同位素標記，從而大大提高了DNA測序的速度和準確性。4種雙脫氧核苷酸(ddNTP)的堿基分別用不同的熒光進行標記，在通過毛細管時不同長度的DNA片段上的4種熒光基團被激光激發，發出不同顏色的熒光，被CCD檢測系統識別，并直接翻譯成DNA序列。