前言:

制備高質量的病理切片需要一定的技巧和經驗。

該教程的目的是協助初學者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經驗更豐富的技術專家的進修課程。涵蓋輪轉式切片機制備石蠟切片的設置和操作相關的基本內容。同時對切片過程中的部分常見故障進行具體說明，并提供故障排除建議。

06 設定最佳刀片間隙角

刀片間隙角可調,必須進行恰當設定以達到最佳性能。

間隙角可防止刀面和蠟塊表面接觸。

切面角是形成切削刃的兩個切面之間的角度。對于常規使用的刀片和可調換式刀片,切面角大約為35°°,但該角度可能因刀片類型和制造商的不同而發生

因此,必須針對每種刀片類型設定最佳間隙角。

在進行角度設定時,應遵循切片機制造商指南。對于Leica生物系統的刀片和刀片架,推薦的設定角度為1至5°

07刀片最長使用壽命

采用一些簡單的策略可使每個刀片均達到最長的使用壽命。

清潔刀片時,避免沿刀刃拖動任何物品。即使是纖維素纖維亦可以對刀片造成損壞。

避免刀刃接觸任何硬質物體,如鉗子或刷子。

有條不紊的使用刀片,從一端工作至另一端。這將使刀片的每一部分均達到最大使用壽命。

使用刀片的一部分進行修塊,使用另一部分進行最終切片,或者使用獨立刀片進行此兩個步驟。

回縮式切片機可在刀片上行運動過程中使蠟塊與刀片脫離接觸,從而使刀片壽命最大化,且可防止刀片復位過程中產生碎片。

08確定定向蠟塊

切割沖程中蠟塊與刀片的定向可以影響獲取帶狀物的難易程度,并可直接影響切片的質量。

在大多數實驗室,所有包埋盒均按照相同的方向被置于樣本夾上(如東-西方向且標簽向左,或北南方向且標簽向上)。這樣處理的目的在于在制備高質量切片之前對多個蠟塊進行粗修,并允許對組織進一步切割或再切割。且不會造成組織損耗過大。因此,在包埋階段即必須考慮到蠟塊與刀片的相對方向,此要求經常被忽視。

圖A為部分典型蠟塊的最佳取向。針對特定的蠟塊類型,何種取向為最佳可能存在不同意見,但必須意識到取向的重要性并加以考慮。

例A.腸:刀片持續性通過粘膜

例B子宮頸:最好是將組織致密處呈遞至刀片,而非直邊。

例C皮膚:刀片持續性通過表皮

切片機(如RM2235)還配備有可進行校準控制的精密定位裝置,可以在x/y軸上很容易找到零點或可測量的變量。此項功能非常有助于對其他實驗室制備的蠟塊或已經過其他切片機切割的蠟塊進行再切割,因為其需要精確對齊以防止不必要的組織損失。同時對多個蠟塊進行切割時應常規使用,重要的是在開始切割之前夾持架應被設定至x/y軸的零位置。通過采用指示器(紅色)、切口點(點擊停止)和指示標記即可非常容易地實現此設定。

（圖A）

09了解切片機的設計特點及其使用方法

回縮式切片機的設計理念在于標本上行沖程中回縮,讓蠟塊遠離刀片。重要的是要知道您所使用的切片機是否具備此功能。

回縮是切片機的設計特點之一,可在切片過程中提供獨特的優勢并可延長刀片壽命。

當使用回縮式切片機時,蠟塊下行沖程中必須將蠟塊表面對齊刀口(即處于前出位置,而非退縮位置)。

當標本夾處于退縮位置時,如果蠟塊仍然與刀口非常接近,在手輪下一次完整旋轉時,蠟塊將前出,前出量為退縮量+選定的切片厚度。這將導致切片厚度增加,并可能導致損壞蠟塊和刀片。

切片機也可以手動、半自動或全自動。

自動化設備可減少重復動作,而這些動作可能導致肌肉骨骼疾病。

10“修塊”、“表面加工”或“初步加工”時應注意

切片機的該階段需要非常小心，因為樣本表面具有診斷學意義的組織很容易丟失或損壞。

在您開始修塊之前,請務必確保所有的夾持機械均已得到安全加固。

正確修塊的目的在于將組織保守暴露至一定水平,在該水平可以獲得目標性切片。

當厚度為10至30μm時,通常應進行修塊。

對脆性組織進行快速粗修可能破壞標本表面。在30μm厚度使用機械修塊設備時應特別注意。

最后一步則通過輕柔切割少許薄切片對蠟塊進行磨光。

在對蠟塊進行修塊之前,持刀架底部夾架A、側向位移夾B和x-y定位夾C均應該牢固鎖定。如果不執行此操作,可能會損壞蠟塊和刀片。

當進行初步加工時,機械修塊設備時應謹慎使用,尤其是較低)設定被激活時可導致30μm的前出。

當初步加工時,粗進刀輪需要謹慎使用,以避免從樣品表面意外切割較厚切片并造成損害。

11考慮切片厚度的影響因素

按照需要設定切片機,但請注意,有許多因素均可影響實際的切片厚度。

4μm厚的粘性切片會比2μm厚的嚴重破壞切片提供更多的信息。

當對冷凍蠟塊進行切片時,條帶中第一對切片的實際厚度可能比預期值厚。主要原因是由于熱膨脹(請參見下文第1、2和3節)。

其他因素，如旋轉速度、間隙角設置和刀刃的情況,均會影響獲得的實際切片厚度。

12確保蠟塊冷凍

當標本和石蠟的硬度匹配良好時,切片質量通常可得到改善。正是由于該原因,大多數石蠟塊在切片時必須冷凍。用于冷凍蠟塊的方法亦非常重要。

冷凍石蠟可為標本中的較硬成分提供更好的支持,以獲得更薄的切片。

將蠟塊置于冷卻臺或濕冷表面,持續幾分鐘(比如融冰的表面)。

水將小幅度滲透進入蠟塊,使組織腫脹,因此更適合進行切片。對于過度脫水、過度干燥或易碎的組織,這將非常重要。

如果組織與周圍石蠟存在接觸不良,將蠟塊置于冰箱中會導致此處的表面開裂,可能更難以獲得粘性切片。

左邊的切片源自于一塊未進行冷凍的溫度相對較高的蠟塊。右邊的切片源自于一塊相同、但在融冰表面進行了冷卻的蠟塊。

以上便是本期教程內容。該教程列出的切片機照片為RM2235手動切片機，但所提供的建議和意見均可應用于最先進的輪轉式切片機。本期教程已結束，敬請期待下期《石蠟切片的制備指南（下）》。

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