細胞內基因的定點敲除、敲入

2013年 1月份，美國兩個實驗室在《 Science》雜志發表了基于 CRISPR-Cas9技術在細胞系中進行基因敲除的新方法，該技術與以往的技術不同，是利用靶點特異性的 RNA將 Cas9核酸酶帶到基因組上的具體靶點，從而對特定基因位點進行切割導致突變。具有效率高、速度快、生殖系轉移能力強及簡單經濟的特點。

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（CRISPR）是細菌和古細菌為應對病毒和質粒

不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制，其中 II型 CRISPR/Cas免疫系統依賴 Cas9內切酶家族靶向和剪

切外源 DNA。在這一系統中， crRNA（CRISPR-derived RNA）通過堿基配對與 tracrRNA（trans-activating RNA）

結合形成雙鏈 RNA，此 tracrRNA/crRNA二元復合體指導 Cas9蛋白在 crRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈

DNA，其中 Cas9的 HNH核酸酶結構域剪切互補鏈，其 RuvC-like結構域剪切非互補鏈。具體如下圖所示：

基因敲除（敲入）流程：

                             做實驗，掃一掃