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Pull down實驗
根據研究對象的不同,可以分為:DNA pull down、RNA pull down、GST pull down。
服務類別:分子與細胞總訪問:670
最后更新:2024-12-27半年訪問:69
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DNA pull-down體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上,再與細胞核蛋白孵育,純化出與DNA片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產物,做Western-blot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合;做質譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如:轉錄因子、組蛋白等)。
RNA pull down體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子,再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體,洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合;或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。
GST pull-down技術是一種體外驗證或篩選互作蛋白的技術。該技術將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽(如:GST標簽)進行融合表達,而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲,形成"次級親和支持物",用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產物洗脫后,經Western blot驗證或LC-MS/MS,即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。
GST pull-down
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