哺乳動物細(xì)胞表達(dá)服務(wù)（SC1259）

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在過去二十年中, 重組蛋白（r-蛋白），特別是用于結(jié)構(gòu)-功能分析的已純化蛋白，在生物制藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛。由于應(yīng)用于該領(lǐng)域的r-蛋白基本上均需要翻譯后修飾，以獲得與天然分子相同的生物活性，而哺乳動物細(xì)胞自身具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，因此很多客戶選擇哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)高質(zhì)量的r-蛋白。

如果在您的實驗過程中，出現(xiàn)關(guān)鍵性蛋白折疊問題或E.coli在充裕的時間內(nèi)仍無法表達(dá)蛋白，或表達(dá)的蛋白質(zhì)量不高等問題時，您可以嘗試金斯瑞哺乳動物蛋白表達(dá)服務(wù)。我們的蛋白表達(dá)專家能在四周內(nèi)提供mg級的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的蛋白 ，幫助您快速獲得滿意的實驗結(jié)果。

服務(wù)優(yōu)勢

• 能實現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性
• 穩(wěn)定及瞬時蛋白表達(dá)
• 高效啟動子(CMV, SV40)控制蛋白表達(dá)
• 表達(dá)水平高
• 大規(guī)模蛋白表達(dá)

服務(wù)內(nèi)容

• 載體構(gòu)建及改進
  • 不論是穩(wěn)定或是瞬時表達(dá)，金斯瑞均可將客戶的cDNA克隆至客戶或金斯瑞提供的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體中。如果客戶需要，金斯瑞可在每個表達(dá)載體中添加分泌信號或標(biāo)簽，以促進親和層析后蛋白的最終修復(fù)。對于更復(fù)雜的方案，如：需要翻譯后特殊修飾，形成復(fù)雜多聚體，多肽內(nèi)或多肽間形成二硫鍵，或特殊的糖基化，金斯瑞推薦定制相關(guān)載體。我們還可以幫助客戶標(biāo)記需要的基因、基因片段或與熒光標(biāo)記相融合（如GFP）。另外，我們能生產(chǎn)并鑒定高效的穩(wěn)定細(xì)胞系，適合客戶擴大生產(chǎn)規(guī)模以及進行cGMP生產(chǎn)。
  
   
• 穩(wěn)定基因表達(dá)符合長期生產(chǎn)需求
  • 整個實驗操作流程，從轉(zhuǎn)染，篩選和細(xì)胞分離，到評估初步克隆在無血清培養(yǎng)條件下的生產(chǎn)能力和適應(yīng)性，提供長期穩(wěn)定及規(guī)模可調(diào)的蛋白生產(chǎn)。
  • 根據(jù)客戶的需求，金斯瑞將進行基因擴增，用于氨甲喋呤以及后續(xù)克隆及儲存。我們也具備全面的遺傳學(xué)研究能力，以及無論選擇的介質(zhì)是否存在的情況下生產(chǎn)的穩(wěn)定性。金斯瑞提供細(xì)胞群儲存服務(wù)，可用作prebanks預(yù)儲備, masterbanks主要儲備, and working cell banks以及工作元件儲備。
  
   
• (TGE) 瞬時表達(dá)
  • 穩(wěn)定基因表達(dá)是將重組基因插入寄主基因組中，但鑒定及檢測重組細(xì)胞系是個耗時、昂貴的過程，因此一些客戶，尤其是轉(zhuǎn)包合同或需大規(guī)模制備最優(yōu)化細(xì)胞系的客戶選擇快速制備r-蛋白，快速蛋白制備(能提供mg（毫克）級至g（克）級)通過使用哺乳動物細(xì)胞TGE滿足這些客戶的需求。與穩(wěn)定基因表達(dá)相比，TGE主要用于短期內(nèi)制備r-蛋白，一般在10天內(nèi)即可快速轉(zhuǎn)染，無需質(zhì)粒DNA的遺傳性選擇。我們的瞬時表達(dá)使用懸浮細(xì)胞，能輕松表達(dá)毫升至100L的蛋白。適合的表達(dá)載體構(gòu)建完成四周左右，我們就能交付給客戶表達(dá)產(chǎn)物：細(xì)胞培養(yǎng)液收集物或重組蛋白。如果客戶需要，金斯瑞能將客戶的目的基因，克隆入專為TGE系統(tǒng)所設(shè)計的高效表達(dá)載體中。
  
   
• 工藝過程開發(fā)及擴大規(guī)模
  • 金斯瑞能優(yōu)化表達(dá)過程以及表達(dá)的產(chǎn)物，并能對增長率,轉(zhuǎn)種率, cell mass細(xì)胞群, 以及更改條件，促進特異化生成并測定生產(chǎn)體積等等方面進行全面的分析。金斯瑞同樣能按比例降低生產(chǎn)規(guī)模，預(yù)測細(xì)胞表達(dá)量。金斯瑞自主研發(fā)的特異性、高生產(chǎn)效率的表達(dá)系統(tǒng)，是提供給客戶高通量生產(chǎn)的最佳保障。
  • ¹⁵N- 或¹³C-標(biāo)簽蛋白表達(dá)。
  
   
• 純化
  • 蛋白表達(dá)后，我們會富集培養(yǎng)液，收集上清或細(xì)胞，進行蛋白純化。金斯瑞常用蛋白純化方式為親和柱純化，同時也提供凝膠過濾、離子交換及疏水層析等純化方法。初步純化的蛋白經(jīng)特殊蛋白酶去除純化標(biāo)簽后，通過凝膠過濾進一步進行純化。
  • ¹⁵N- 或¹³C-標(biāo)簽蛋白表達(dá)。
  
   
• 蛋白鑒定
  • 每個訂單完成后，我們的專家將確認(rèn)金斯瑞交付的產(chǎn)品確實滿足客戶的需求。一般來說，金斯瑞會選取以下幾個或全部檢測方法鑒定表達(dá)的蛋白：染色后進行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）或Native-PAGE(未變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)檢測，蛋白濃度測定，Western blotting檢測，吸收光譜檢測，N末端序列測定，質(zhì)譜分析，核磁共振波譜分析，以及活性檢測，親和層析，離子交換層析，凝膠過濾層析，疏水層析等方法純化蛋白。

服務(wù)特點