RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補配對原則，轉錄形成的一條單鏈，主要功能是使遺傳信息能夠翻譯成蛋白行使生物學功能，是遺傳信息向表型轉化過程中的橋梁。當我們研究基因的表達和調控時，第一步需要做的就是從組織或細胞中分離和純化RNA。

一、RNA提取的原則：

1.保證RNA的完整性；

2.獲得高純度的RNA；

3.操作簡便，穩定性強。

二、抽提RNA的使用目的：

RNA用于不同的后續實驗，其質量要求不盡相同。cDNA文庫構建要求RNA完整而無酶反應抑制物殘留；Northern對RNA完整性要求較高，對酶反應抑制物殘留要求較低；RT-PCR對RNA完整性要求不太高，但對酶反應抑制物殘留要求嚴格。因此，明確實驗目的是進行后續實驗的首要條件。

三、Trizol法抽提

Trizol是一種總RNA抽提試劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。

1）.Trizol作用原理

在勻質化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。水相轉移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質。

2.）標準Trizol提取步驟

液氮研磨--加入Trizol裂解混勻--加入氯仿抽提--離心--加入異丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心--無酶水重溶。

3）.具體實驗步驟

（1）實驗準備

RNase free的槍頭、EP管、PBS、Trizol、氯仿、異丙醇、75%乙醇、RNase free水；

（2）樣本處理

對取下的新鮮組織(50mg)用PBS快速清洗表面附著物，放入離心管，加入1ml Trizol勻漿。室溫靜置5min，4℃，12000 g，離心5min，吸取上層液體至新的離心管中；

（3）氯仿萃取

按0.2 ml氯仿/1 ml Trizol的量加入預冷的氯仿，即200ul，上下振蕩15s，室溫孵育5min。4℃，12000 g，離心15 min。混合物分離為下層紅色的酚-氯仿相、中間相以及上層無色水相，RNA存在于水相。

（4）轉移水相

轉移水相時，槍尖隨著液面下移而下移，避免擾亂分層，慢慢吸取，避免吸到中間相和下層有機相，更不要貪心吸太多，吸大約400ul就好，轉移至新離心管中。

（5）異丙醇沉淀

加入等體積預冷的異丙醇，混勻，靜置10分鐘后，4℃，12000g離心10min，棄上清。異丙醇主要用于沉淀RNA。

（6）乙醇洗滌

加入1ml預冷的75%乙醇，輕輕將整塊沉淀吹起懸浮，此處千萬注意別把RNA沉淀吹散，因為RNA吹散后很難通過離心重新聚集在一起，最終導致實驗失敗。4℃，12000 g，離心5 min。

（7）RNA溶解

盡量吸除上清，室溫干燥3-5min，此處注意不要干燥過度否則會引起RNA難溶甚至降解，也不宜時間過短使酒精揮發不完全。加入30-50ul RNase free水（量視RNA提取量大小而定），充分溶解沉淀，保存于-80℃。

（8）RNA濃度檢測和電泳評估RNA濃度和質量。

當然現在也有許多抽提RNA的試劑盒可供大家選擇，操作相對更加簡單，省時省力。

不同抽提方法優缺點

最后，關于改善RNA提取質量的一些小建議：

1.使用正確的細胞或組織儲存條件，在樣品用液氮速凍后，應該儲存在-80℃，樣品在RNA提取之前應避免反復凍融。

2.研磨過程要迅速，徹底勻漿樣品。

3.盡量使用無RNase的槍頭、試管和溶液，手套也應經常更換；實驗前移液器、工作臺、玻璃器皿，最好用RNaseZap擦拭。

4.建議分裝RNA溶液進行保存，避免反復凍融，導致RNA降解。

5.使用Rnase-free的雙蒸去離子水或其他緩沖液溶解RNA，否則容易導致RNA降解。

6.結合組織樣本本身的特點，選擇最優的抽提方案。