胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵，釋放出的游離羧基與反應體系中的氫氧化鈉發生中和反應，導致溶液的pH值降低，以苯酚紅為指示劑，測定溶液在555nm處吸收值的變化，可以快速測得胰蛋白酶活性數據。胰蛋白酶在一定范圍內與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關系。
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定步驟：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到555 nm，蒸餾水調零。
2. 工作液的配制：臨用前根據用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：蒸餾水（V）：試劑三（V）=1 mL：1 mL：5.4 mL：0.4 mL的比例充分混合。（注意：現用現配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個空瓶）
3. 吸取25μL樣本，加入975 μL工作液，混勻后立即測定，記錄555nm下1min時的吸光值A1和2min時的吸光值A2。計算△A=A1-A2
注意：如果△A小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測定（建議稀釋10倍），計算公式中乘以相應稀釋倍數。
測定意義：                           
胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈，是一種重要的消化酶。此外，胰蛋白酶還廣泛應用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創傷性損傷等所產生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。