高分辨熔解曲線（High Resolution Melting）技術是近年來興起的一種全新的突變掃描和基因分型的遺傳分析方法。HRM不受突變堿基位點與類型局限，無需序列特異性探針，在PCR結束后直接運行高分辨熔解，即可完成對樣品的分析。該方法與其他遺傳分型技術相比具有靈敏度高、特異性好、成本低廉、高通量檢測的優(yōu)點，是進行突變檢測的迅速、廉價而有效的方法。

HRM是在PCR基礎上通過測定DNA雙鏈熔解曲線變化來檢測突變的方法，溶解曲線的變化取決于DNA序列、長度、GC含量，因此，可以通過飽和燃料監(jiān)控熔解曲線的變化來反映核酸性質的差異，從而對樣品進行分析。

在雙鏈體的溶解曲線檢測時需要添加合適的染料，飽和染料例如SYBR Green在雙鏈解鏈過程中會發(fā)生重排，無法真實反映DNA熔解情況。不適用于需低溫解鏈的樣品而且不能檢測異源雙鏈體。因此不能用于熔解曲線的檢測。而LC Green是一種與DNA有更強的結合位點，對PCR抑制作用很小的飽和染料，已成功的用于HRM檢測中。

HRM操作簡便，在PCR結束后添加合適的染料，通過監(jiān)測升溫過程中熒光染料與PCR擴增產物的結合情況來實現的，在升溫過程中，雙鏈解開，熒光染料從解鏈的分子上釋放，同時熒光強度降低，所以通過熒光強度和曲線的變化上就可以判斷是否存在突變。

 

圖一：同源雙鏈體和異源雙鏈體的熔解曲線

 

圖二：HRM數據處理過程

 

HRM應用：

HRM特點：

 

HRM：實驗設計中需要考慮的問題

 

HRM靈敏度高、特異性好

該方法是在封閉的試管內進行，可降低污染，因此，該技術具有操作簡單、成本低廉、時間少、誤差小、高通量檢測的優(yōu)點。是進行突變掃描的首選方法。