大小鼠MCAO造模方法及如何提高成功率的方法介紹
大鼠MCAO造模方法
(1) 麻醉成功后以仰臥位固定于手術臺,常規備皮、消毒。將小鼠門齒利用縫合線鉤住、固定，使得頸部被拉伸，方便接下來的手術操作。利用常規眼科剪或手術刀從頸部正中切開,從頸正中切口,利用鑷子鈍性分離頸部腺體組織、筋膜,暴露并分離頸總動脈( common carotid artery, CCA)、頸外動脈( external carotid artery, ECA)和頸內動脈( internal carotid artery, ICA)。
瑞沃德呼吸&麻醉解決方案
(2)分離ICA及其顱外分支翼顎動脈,利用縫合線打活結，結扎翼顎動脈，或者直接利用血管夾夾閉翼鄂動脈，避免線栓插入翼鄂動脈，保持CCA的唯一開放分支為ICA。
(3)分離ECA主干,并利用電凝筆閉塞ECA的分支,結扎遠心端并將其間斷。在ECA殘端用眼科剪剪開一“V”型小口,剪口之前用微動脈夾夾閉CCA和ICA，避免剪口處出現出血。將預處理過帶硅膠頭的線栓小心地從ECA插入。
(4) 去除ICA的微動脈夾后,插入尼龍線栓直至大腦中動脈的起始處,線栓插入17-18mm(見下圖)。根據筆者的經驗,線栓插入的長度應根據動物體重,如260~280g大鼠,插入深度約17mm,280g以上的大鼠,插入深度約18mm,總之,以遇到輕微的阻力為準,此時線栓正好進入顱內的大腦前動脈,阻塞大腦中動脈的開口。
MCAO線栓法模型操作主要步驟示意圖
(5) 若要恢復大腦中動脈的血流,只需把線栓拔出,使頭端退到頸外動脈,頸總動脈的血流就可以再灌注到大腦中動脈。
(6) 結扎消毒后逐層縫合皮下組織和皮膚,等動物麻醉蘇醒后放回籠中即可。
(7) 手術結束后應用激光散斑血流成像儀監測大腦皮層血流,當看到大腦皮層血液血流降低70%~80%,說明模型制備成功。
小鼠MCAO造模方法
小鼠MCAO模型的制作與大鼠的基本相同,可不結扎翼顎動脈,而是在進線栓時調整角度小心避開。其他不同之處在于,線栓為5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅膠),長度為15mm。根據動物體重的具體情況,線栓插入頸內動脈(10±0.5)mm即可,保證線栓正好進入顱內的大腦前動脈,阻塞大腦中動脈的開口。
如何提高MCAO造模成功率？
（1）挑選合適線栓，滿足一下幾點要求：
（2）采用散斑血流儀，實時觀測顱腦血流情況。這樣可以準確判斷線栓是否阻塞MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
（3）MCAO線栓手術屬于顯微操作手術，不可控因素較多，需要多練習。一般常規連續練習3個月左右，即可實現造模；如果采用血流儀輔助造模，時間可以縮短至1個月，手術過程中可以實時調整線栓位置。另外現在發文越來越需要漂亮數據，瑞沃德的激光散斑血流儀RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布圖。
(1) 麻醉成功后以仰臥位固定于手術臺,常規備皮、消毒。將小鼠門齒利用縫合線鉤住、固定，使得頸部被拉伸，方便接下來的手術操作。利用常規眼科剪或手術刀從頸部正中切開,從頸正中切口,利用鑷子鈍性分離頸部腺體組織、筋膜,暴露并分離頸總動脈( common carotid artery, CCA)、頸外動脈( external carotid artery, ECA)和頸內動脈( internal carotid artery, ICA)。
瑞沃德呼吸&麻醉解決方案
(2)分離ICA及其顱外分支翼顎動脈,利用縫合線打活結，結扎翼顎動脈，或者直接利用血管夾夾閉翼鄂動脈，避免線栓插入翼鄂動脈，保持CCA的唯一開放分支為ICA。
(3)分離ECA主干,并利用電凝筆閉塞ECA的分支,結扎遠心端并將其間斷。在ECA殘端用眼科剪剪開一“V”型小口,剪口之前用微動脈夾夾閉CCA和ICA，避免剪口處出現出血。將預處理過帶硅膠頭的線栓小心地從ECA插入。
MCAO線栓法模型操作主要步驟示意圖(5) 若要恢復大腦中動脈的血流,只需把線栓拔出,使頭端退到頸外動脈,頸總動脈的血流就可以再灌注到大腦中動脈。
(6) 結扎消毒后逐層縫合皮下組織和皮膚,等動物麻醉蘇醒后放回籠中即可。
小鼠MCAO造模方法
小鼠MCAO模型的制作與大鼠的基本相同,可不結扎翼顎動脈,而是在進線栓時調整角度小心避開。其他不同之處在于,線栓為5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅膠),長度為15mm。根據動物體重的具體情況,線栓插入頸內動脈(10±0.5)mm即可,保證線栓正好進入顱內的大腦前動脈,阻塞大腦中動脈的開口。
如何提高MCAO造模成功率？
（1）挑選合適線栓，滿足一下幾點要求：
- 線栓不可過硬。過硬線栓容易找手感，但是容易出現刺破蛛網膜下腔血管，導致顱內出血。同時過硬線栓還會改變血管自然形態，當線栓插入血管以后，因為線栓過硬，血管肌張力無法使得線栓改變形態，只能被線栓改變形態，導致血管處于緊繃狀態，對于再灌注操作不利。
- 選擇硅膠頭盡可能接近圓柱形的線栓，這樣當線栓進入MCA外后，能夠完全堵塞MCA，而不會出現縫隙，使得線栓可以立即阻塞MCA。
（2）采用散斑血流儀，實時觀測顱腦血流情況。這樣可以準確判斷線栓是否阻塞MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
（3）MCAO線栓手術屬于顯微操作手術，不可控因素較多，需要多練習。一般常規連續練習3個月左右，即可實現造模；如果采用血流儀輔助造模，時間可以縮短至1個月，手術過程中可以實時調整線栓位置。另外現在發文越來越需要漂亮數據，瑞沃德的激光散斑血流儀RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布圖。
瑞沃德激光散斑血流成像系統RFLSI Ⅲ
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