幾種PCR方法概述及其優點
一、反向PCR
反向PCR是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的未知序列的片段，而常規PCR擴增的是已知序列的兩引物之間DNA片段.實驗時選擇已知序列內部沒有切點的限制性內切酶對該段DNA進行酶切，然后用連接酶使帶有粘性末端的靶序列環化連接，再用一對反向的引物進行PCR，其擴增產物將含有兩引物外未知序列，從而對未知序進行分析研究。
二、不對稱PCR
不對稱PCR是用不等量的一對引物，PCR擴增后產生大量的單鏈DNA這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物，其比例一般為50～100∶1.在PCR反應的最初10～15個循環中，其擴增產物主要是雙鏈DNA，但當限制性引物低濃度引物消耗完后，非限制性引物高濃度引物引導的PCR就會產生大量的單鏈DNA.不對稱PCR的關鍵是控制限制性引物的絕對量，需多次摸索優化兩條引物的比例.還有一種方法是先用等濃度的引物PCR擴增，制備雙鍵DNA，然后以此dsDNA為模板，再以其中的一條引物進行第二次PCR，制備ssDNA.不對稱PCR制備的ssDNA，主要用于核酸序列測定。
三、重組PCR
使兩個不相鄰的DNA片段重組在一起的PCR稱為重組PCR，1986年報道了由PCR擴增的兩個DNA片段通過重組合后再經延伸而制備出新的DNA分子.其基本原理為將突變堿基，插入或缺失片段，或一種物質的幾個基因片段均設計在引物中，先分段對模板擴增，除去多余的引物后，將產物混合，再用一對引物對其進行PCR擴增.其產物將是一重組合的DNA.重組PCR主要用于位點專一堿基置換，DNA片段的插入或缺失DNA片段的連接(如基因工程抗體）。
四、多重PCR
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同。
五、免疫PCR
免疫試驗的主要步驟有三個:
①抗原抗體反應，
②與嵌合連接分子結合，
③PCR擴增嵌合連接分子中的DNA一般為質粒DNA該技術的關鍵環節是嵌合連接分子的制備.在免疫-PCR中，嵌合連接分子起著橋梁作用，它有兩個結合位點，一個與抗原抗體復合物中的抗體結合，一個與質粒DNA結合，其基本原理與ELISA和免疫酶染色相似，不同之處在于其中的標記物不是酶而是質粒DNA，在操作反應中形成抗原抗體-連接分子復合物，通過PCR擴增DNA來判斷是否存在特異性抗原。
免疫PCR優點為:
①特異性較強，因為它建立在抗原抗體特異性反應的基礎上。
②敏感度高，PCR具有驚人的擴增能力，免疫PCR比ELISA敏感度高105倍以上，可用于單個抗原的檢測。
③操作簡便，PCR擴增質粒DNA比擴增靶基因容易得多，一般實驗室均能進行。
反向PCR是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的未知序列的片段，而常規PCR擴增的是已知序列的兩引物之間DNA片段.實驗時選擇已知序列內部沒有切點的限制性內切酶對該段DNA進行酶切，然后用連接酶使帶有粘性末端的靶序列環化連接，再用一對反向的引物進行PCR，其擴增產物將含有兩引物外未知序列，從而對未知序進行分析研究。
二、不對稱PCR
不對稱PCR是用不等量的一對引物，PCR擴增后產生大量的單鏈DNA這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物，其比例一般為50～100∶1.在PCR反應的最初10～15個循環中，其擴增產物主要是雙鏈DNA，但當限制性引物低濃度引物消耗完后，非限制性引物高濃度引物引導的PCR就會產生大量的單鏈DNA.不對稱PCR的關鍵是控制限制性引物的絕對量，需多次摸索優化兩條引物的比例.還有一種方法是先用等濃度的引物PCR擴增，制備雙鍵DNA，然后以此dsDNA為模板，再以其中的一條引物進行第二次PCR，制備ssDNA.不對稱PCR制備的ssDNA，主要用于核酸序列測定。
三、重組PCR
使兩個不相鄰的DNA片段重組在一起的PCR稱為重組PCR，1986年報道了由PCR擴增的兩個DNA片段通過重組合后再經延伸而制備出新的DNA分子.其基本原理為將突變堿基，插入或缺失片段，或一種物質的幾個基因片段均設計在引物中，先分段對模板擴增，除去多余的引物后，將產物混合，再用一對引物對其進行PCR擴增.其產物將是一重組合的DNA.重組PCR主要用于位點專一堿基置換，DNA片段的插入或缺失DNA片段的連接(如基因工程抗體）。
四、多重PCR
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同。
五、免疫PCR
免疫試驗的主要步驟有三個:
①抗原抗體反應，
②與嵌合連接分子結合，
③PCR擴增嵌合連接分子中的DNA一般為質粒DNA該技術的關鍵環節是嵌合連接分子的制備.在免疫-PCR中，嵌合連接分子起著橋梁作用，它有兩個結合位點，一個與抗原抗體復合物中的抗體結合，一個與質粒DNA結合，其基本原理與ELISA和免疫酶染色相似，不同之處在于其中的標記物不是酶而是質粒DNA，在操作反應中形成抗原抗體-連接分子復合物，通過PCR擴增DNA來判斷是否存在特異性抗原。
免疫PCR優點為:
①特異性較強，因為它建立在抗原抗體特異性反應的基礎上。
②敏感度高，PCR具有驚人的擴增能力，免疫PCR比ELISA敏感度高105倍以上，可用于單個抗原的檢測。
③操作簡便，PCR擴增質粒DNA比擴增靶基因容易得多，一般實驗室均能進行。
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