Western免疫印跡，是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。

與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，探針是抗體，顯色用標記的二抗。

經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

下面具體介紹蛋白樣品制備：
1.   單層貼壁細胞總蛋白的提取
 
（1） 倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。
 
（2） 每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養液。將PBS棄凈后把培養瓶置于冰上。
 
（3）按1ml裂解液加10 ul PMSF（100 mM），搖勻置于冰上。（PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。）
 
（4） 每瓶細胞加400 ul含PMSF的裂解液，于冰上裂解30 min，為使細胞充分裂解培養瓶要經常來回搖動。
 
（5）裂解完后，用干凈的刮棒將細胞刮于培養瓶的一側（動作要快），然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5 ml離心管中。（整個操作盡量在冰上進行。）
 
（6）于4℃下12000 rpm離心5 min。（提前開離心機預冷）
 
（7） 將離心后的上清分裝轉移倒0.5 ml的離心管中放于－20℃保存。
 
2.   組織中總蛋白的提取
 
（1）將少量組織塊置于1～2 ml勻漿器中球狀部位，用干凈的剪刀將組織塊盡量剪碎。
 
（2） 加400 uL單去污劑裂解液裂（含PMSF）于勻漿器中，進行勻漿。然后置于冰上。
 
（3）幾分鐘后再碾一會兒再置于冰上，要重復碾幾次使組織盡量碾碎。
 
（4） 裂解30 min后，即可用移液器將裂解液移至1.5 ml離心管中，然后在4℃下12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml離心管中并置于－20℃保存。
 
3.   加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取
 
由于受藥物的影響，一些細胞脫落下來，所以除按1操作外還應收集培養液中的細胞。以下是培養液中細胞總蛋白的提取：
 
（1）將培養液倒至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。
 
（2）棄上清，加入4 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復洗滌一次。
 
（3）用槍洗干上清后，加100 uL裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充分裂解。
 
（4）將裂解液與培養瓶中裂解液混在一起4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml離心管中并置于－20℃保存。