實時熒光定量PCR技術（Real-time quantitative PCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

熒光定量PCR以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點成為了分子生物學研究中的重要工具，目前已得到廣泛應用（如轉基因動植物檢測、RNAi基因失活率檢測、病原微生物或病毒含量檢測、基因差異表達、基因分型）。

基線在PCR擴增反應的最初數個循環里，熒光信號變化不大，接近一條直線，這樣的直線即基線。光域值threshold的設定，一般將PCR反應前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值是PCR3-15個循環熒光信號標準差的10倍，熒光域值設定在PCR擴增的指數期。

CT值表示每個PCR反應管內熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。研究表明，各模板的CT值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，起始拷貝數越多，CT值越小，反之亦然。

融解曲線是用來驗證擴增產物特異性的，如果產物是單一條帶，融解曲線就會出現一尖峰；如果有引物二聚體或其它非特異性擴增，就會出現至少兩個尖峰。