大鼠ELISA實驗間接法實驗步驟
ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetection Ab），形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質（substrate），作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
大鼠ELISA實驗間接法實驗步驟：
1、抗原包被過夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過夜。
抗原用量：0.1μg*100N/抗原濃度 （N為板數）
2、封閉：棄上清 加300μL/孔封閉液，37℃放置2h。
3、洗滌：用洗滌液洗3次
4、加一抗(待測樣品為細胞培養上清)：將含單克降抗體的細胞培養上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培養基作為陰性對照，已知樣品血清（1：200稀釋于1%BSA+PBST中）作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。
測免疫效價待測樣品為小鼠血清時：采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續倍比稀釋(按照1：200開始)，100μL /孔。每個樣品平行做兩份，小鼠陰性血清或空白培養基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。
5、洗滌：用洗滌液洗5次。
6、加二抗（酶標抗抗體）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀釋，100μL／孔， 37℃恒溫箱溫育1h。
7、洗滌：用洗滌液洗5次，
8、顯色：加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒溫箱放置10min，顯示藍色。
9、終止反應、比色：加30μL/孔H2SO4終止液．顏色變黃；用酶標儀測定450nm 630nm處各孔的吸光值，陽性反應的最大稀釋度為待測樣品的效價。
大鼠ELISA實驗間接法實驗步驟：
1、抗原包被過夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過夜。
抗原用量：0.1μg*100N/抗原濃度 （N為板數）
2、封閉：棄上清 加300μL/孔封閉液，37℃放置2h。
3、洗滌：用洗滌液洗3次
4、加一抗(待測樣品為細胞培養上清)：將含單克降抗體的細胞培養上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培養基作為陰性對照，已知樣品血清（1：200稀釋于1%BSA+PBST中）作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。
測免疫效價待測樣品為小鼠血清時：采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續倍比稀釋(按照1：200開始)，100μL /孔。每個樣品平行做兩份，小鼠陰性血清或空白培養基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。
5、洗滌：用洗滌液洗5次。
6、加二抗（酶標抗抗體）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀釋，100μL／孔， 37℃恒溫箱溫育1h。
7、洗滌：用洗滌液洗5次，
8、顯色：加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒溫箱放置10min，顯示藍色。
9、終止反應、比色：加30μL/孔H2SO4終止液．顏色變黃；用酶標儀測定450nm 630nm處各孔的吸光值，陽性反應的最大稀釋度為待測樣品的效價。
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